| 查看: 2349 | 回复: 16 | ||||
[求助]
有关细胞总RNA提取
|
|
各位虫友： 大家好！ 请教一个问题，我使用TRAZOl试剂提取细胞总RNA进行细胞因子测定,采用了多种不同的方式处理细胞，本来应该增加的细胞因子却呈现降低趋势，怀疑是RNA提取出现了问题，电泳进行了表征，很怪异。但是我将PCR之后的内标actin进行电泳，很正常，PCR是均在18左右出峰，不知道总RNA提取是否是失败，现附上电泳图请大家帮忙分析一下。  对细胞不同处理后12种样品的总RNA电泳图.jpg  12种样品actin的电泳图.png |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有257人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 提RNA和培养细胞的先后顺序
已经有13人回复
- 植物细胞RNA提取用的研钵要高温灭菌么？
已经有16人回复
- 【求助/交流】拟南芥保卫细胞原生质体RNA提取电泳图，出现反向弥散？
已经有6人回复
- trizol试剂提取细胞内总RNA时，加入试剂后一定要在4度下离心吗？
已经有6人回复
- 新手用试剂盒提取植物RNA时的一些小问题
已经有21人回复
- Qiagen（MOBIO）土壤、血液、水样、植物、粪便、组织细胞DNA/RNA提取试剂盒
已经有614人回复
- 24孔板细胞可以提RNA和蛋白吗
已经有3人回复
- 如何提取单个细胞的RNA
已经有9人回复
- Trizol 如何提起细胞培养液中的病毒RNA
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教高手关于从细胞中提取总RNA
已经有8人回复
- 【求助/交流】从单个核细胞中提取RNA的问题？
已经有3人回复
- 【求助/交流】Hela细胞中RNA的提取
已经有6人回复
- 【求助/交流】寻能代做细胞中RNA提取的公司？？？
已经有12人回复
- 有关RNA提取的问题
已经有12人回复
- 谁能告诉我怎样在血液的淋巴细胞中提RNA
已经有8人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-04-24 04:45:33
..........................帮您顶一个...................................3楼2013-04-24 07:37:30
zhlf1989513
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 1806.2
- 红花: 2
- 帖子: 252
- 在线: 257.5小时
- 虫号: 1794702
- 注册: 2012-05-04
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
4楼2013-04-24 10:00:09
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-24 17:29:21
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-24 17:29:21
|
我提取的也总是降解，所用的器皿也用DEPC水泡过，过程如下：收菌以后用生工家的trizol悬浮菌体，液氮研磨，每1mltrizol 0.2ml氯仿的量加入氯仿，手摇混匀2min,在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g4℃离心10分钟。取上层水相置于新EP管中，加等体积l异丙醇。放置20分钟，12000g4℃离心10分钟。 弃上清，按照每管加1ml 75%乙醇进行洗涤，12000g4℃离心5分钟，弃上清；让沉淀的RNA在室温下自然干燥； 用DEPC熏蒸过的水溶解RNA沉淀。 我的电泳槽也用DEPC水泡过  |
5楼2013-04-24 10:40:38
6楼2013-04-24 17:20:09
7楼2013-04-24 17:21:48
8楼2013-04-24 17:26:28
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24338.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
821078607: 金币+5, 谢谢 2013-04-25 20:24:23
感谢参与，应助指数 +1
821078607: 金币+5, 谢谢 2013-04-25 20:24:23
|
提的好的RNA应该是这样子的，请见贴子http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5797357&authorid=849017的回复 你110V跑40min，太久了，你可以160V 跑10min，RNA不宜跑时间太长 |
9楼2013-04-24 17:32:17
raindick1231
铜虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 93.3
- 帖子: 83
- 在线: 26.5小时
- 虫号: 649284
- 注册: 2008-11-08
- 性别: GG
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
821078607(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励新虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-26 19:34:09
821078607: 金币+6, ★★★很有帮助, 非常感谢 2013-04-28 10:17:30
感谢参与，应助指数 +1
821078607(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励新虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-26 19:34:09
821078607: 金币+6, ★★★很有帮助, 非常感谢 2013-04-28 10:17:30
|
那个我做的植物 用的也是TRIZOL，原理一样。我的经验是在取上清之前的一切步骤 “不需要” 注意RNase污染，但是样品不能过多（很重要！！！），而且要注意不要交叉污染。 取上清之后要小心，乙醇、异丙醇之类的不用多说降解了就换吧，配75乙醇的瓶子用锡箔纸封口多烘几个，枪头、EP管之类的耗材。。。我用的是包装上注明了RNase-free的，所以从来不用DEPC处理的，也不灭菌。。。成本也不高 唯一我认为比较麻烦的就是水了。。。。所以RNA很简单的 我一般一口气提30个（离心机所限）希望对你有用，祝好运！ |
10楼2013-04-24 20:48:33
30