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有关细胞总RNA提取
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各位虫友： 大家好！ 请教一个问题，我使用TRAZOl试剂提取细胞总RNA进行细胞因子测定,采用了多种不同的方式处理细胞，本来应该增加的细胞因子却呈现降低趋势，怀疑是RNA提取出现了问题，电泳进行了表征，很怪异。但是我将PCR之后的内标actin进行电泳，很正常，PCR是均在18左右出峰，不知道总RNA提取是否是失败，现附上电泳图请大家帮忙分析一下。  对细胞不同处理后12种样品的总RNA电泳图.jpg  12种样品actin的电泳图.png |
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cicelyzh
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2楼2013-04-24 04:45:33
jwucn
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zhlf1989513
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4楼2013-04-24 10:00:09
【答案】应助回帖
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我提取的也总是降解，所用的器皿也用DEPC水泡过，过程如下：收菌以后用生工家的trizol悬浮菌体，液氮研磨，每1mltrizol 0.2ml氯仿的量加入氯仿，手摇混匀2min,在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g4℃离心10分钟。取上层水相置于新EP管中，加等体积l异丙醇。放置20分钟，12000g4℃离心10分钟。 弃上清，按照每管加1ml 75%乙醇进行洗涤，12000g4℃离心5分钟，弃上清；让沉淀的RNA在室温下自然干燥； 用DEPC熏蒸过的水溶解RNA沉淀。 我的电泳槽也用DEPC水泡过  |
5楼2013-04-24 10:40:38
6楼2013-04-24 17:20:09
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gyesang
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821078607: 金币+5, 谢谢 2013-04-25 20:24:23
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提的好的RNA应该是这样子的，请见贴子http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5797357&authorid=849017的回复 你110V跑40min，太久了，你可以160V 跑10min，RNA不宜跑时间太长 |
9楼2013-04-24 17:32:17
raindick1231
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821078607(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励新虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-26 19:34:09
821078607: 金币+6, ★★★很有帮助, 非常感谢 2013-04-28 10:17:30
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那个我做的植物 用的也是TRIZOL，原理一样。我的经验是在取上清之前的一切步骤 “不需要” 注意RNase污染，但是样品不能过多（很重要！！！），而且要注意不要交叉污染。 取上清之后要小心，乙醇、异丙醇之类的不用多说降解了就换吧，配75乙醇的瓶子用锡箔纸封口多烘几个，枪头、EP管之类的耗材。。。我用的是包装上注明了RNase-free的，所以从来不用DEPC处理的，也不灭菌。。。成本也不高 唯一我认为比较麻烦的就是水了。。。。所以RNA很简单的 我一般一口气提30个（离心机所限）希望对你有用，祝好运！ |
10楼2013-04-24 20:48:33
