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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关细胞总RNA提取
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 821078607 at 2013-04-24 17:20:09
电泳用的RNA浓度很大，用了7.5微升 不过配置电泳液直接用的二次蒸馏水 电泳40分钟左右  不知道这个会不会对RNA有影响...

电泳时间太长，尽量缩短时间，用较高的电压跑。
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11楼2013-04-25 01:26:46
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821078607

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by raindick1231 at 2013-04-24 20:48:33
那个我做的植物 用的也是TRIZOL，原理一样。我的经验是在取上清之前的一切步骤 “不需要” 注意RNase污染，但是样品不能过多（很重要！！！），而且要注意不要交叉污染。
        取上清之后要小心，乙醇、异丙醇之 ...

你好，再请教你一下有关具体的75%配置的方法，我一般都打开一瓶新的乙醇，用DEPC水稀释，用无核酸酶的EP做容器，没有灭菌就直接用了，这样有影响吗
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12楼2013-04-25 20:23:47
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 821078607 at 2013-04-24 17:21:48
测定细胞因子是用的半定量PCR...

楼主既然要做半定量PCR，建议测一下RNA浓度吧。。。因为RNA实在是太容易降解了。。。
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keepon
13楼2013-04-26 08:26:40
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raindick1231

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 821078607 at 2013-04-25 20:23:47
你好，再请教你一下有关具体的75%配置的方法，我一般都打开一瓶新的乙醇，用DEPC水稀释，用无核酸酶的EP做容器，没有灭菌就直接用了，这样有影响吗...

你的方法应该没问题，我一般准备几个 量筒100mL 和 锥形瓶 分别用锡箔纸封口，烘完了用新的无水乙醇跟DEPC处理水配置就好了，感觉可能要污染了就换。。。。有点神经质了。。。。
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14楼2013-04-27 19:39:44
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raindick1231

铜虫 (小有名气)
还有 不要用PE手套 那个太大了 很可能增加污染的几率，就带一个口罩 一双橡胶手套 一路走到黑
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15楼2013-04-27 20:10:11
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麦戈桑默

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 821078607 at 2013-04-24 17:26:28
我电泳时没有用DEPC水 电泳条件为100V 40min 这样会不会影响RNA电泳 RNA会不会在电泳的时候降解...

我后来用没有处理过的TAE跑电泳 感觉影响不大啊
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16楼2013-05-06 11:10:54
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qihoubao

银虫 (小有名气)
请问你的问题解决了吗
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17楼2013-07-09 19:36:40
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