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821078607

银虫 (小有名气)

[求助] 有关细胞总RNA提取

各位虫友:
大家好!
请教一个问题,我使用TRAZOl试剂提取细胞总RNA进行细胞因子测定,采用了多种不同的方式处理细胞,本来应该增加的细胞因子却呈现降低趋势,怀疑是RNA提取出现了问题,电泳进行了表征,很怪异。但是我将PCR之后的内标actin进行电泳,很正常,PCR是均在18左右出峰,不知道总RNA提取是否是失败,现附上电泳图请大家帮忙分析一下。

对细胞不同处理后12种样品的总RNA电泳图.jpg



12种样品actin的电泳图.png
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jwucn

至尊木虫 (文坛精英)

..........................帮您顶一个...................................
3楼2013-04-24 07:37:30
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查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
821078607: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2013-04-25 20:25:09
感觉你的RNA质量不行。电泳的上样量是多少?
2楼2013-04-24 04:45:33
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
821078607: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-04-24 17:22:19
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-24 17:28:56
821078607: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2013-04-25 20:24:50
你是怎么检测细胞因子的表达呢?后续做qRT-PCR么?虽然RNA有些降解,但我觉得内参P出来挺好的,所以这个RNA也可以用来做后续的实验。。。因为它并不是完全降解了。。。
keepon
4楼2013-04-24 10:00:09
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麦戈桑默

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-04-24 17:29:21
我提取的也总是降解,所用的器皿也用DEPC水泡过,过程如下:收菌以后用生工家的trizol悬浮菌体,液氮研磨,每1mltrizol 0.2ml氯仿的量加入氯仿,手摇混匀2min,在室温下(15℃~30℃)放置2~3分钟后,12000g4℃离心10分钟。取上层水相置于新EP管中,加等体积l异丙醇。放置20分钟,12000g4℃离心10分钟。        弃上清,按照每管加1ml 75%乙醇进行洗涤,12000g4℃离心5分钟,弃上清;让沉淀的RNA在室温下自然干燥;
用DEPC熏蒸过的水溶解RNA沉淀。

我的电泳槽也用DEPC水泡过
5楼2013-04-24 10:40:38
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