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有关细胞总RNA提取
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各位虫友： 大家好！ 请教一个问题，我使用TRAZOl试剂提取细胞总RNA进行细胞因子测定,采用了多种不同的方式处理细胞，本来应该增加的细胞因子却呈现降低趋势，怀疑是RNA提取出现了问题，电泳进行了表征，很怪异。但是我将PCR之后的内标actin进行电泳，很正常，PCR是均在18左右出峰，不知道总RNA提取是否是失败，现附上电泳图请大家帮忙分析一下。  对细胞不同处理后12种样品的总RNA电泳图.jpg  12种样品actin的电泳图.png |
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jwucn
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3楼2013-04-24 07:37:30
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4楼2013-04-24 10:00:09
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
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我提取的也总是降解，所用的器皿也用DEPC水泡过，过程如下：收菌以后用生工家的trizol悬浮菌体，液氮研磨，每1mltrizol 0.2ml氯仿的量加入氯仿，手摇混匀2min,在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g4℃离心10分钟。取上层水相置于新EP管中，加等体积l异丙醇。放置20分钟，12000g4℃离心10分钟。 弃上清，按照每管加1ml 75%乙醇进行洗涤，12000g4℃离心5分钟，弃上清；让沉淀的RNA在室温下自然干燥； 用DEPC熏蒸过的水溶解RNA沉淀。 我的电泳槽也用DEPC水泡过  |
5楼2013-04-24 10:40:38
