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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 96孔板，用酶标仪测细菌生长曲线
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smallhorse88

新虫 (小有名气)

[求助] 96孔板，用酶标仪测细菌生长曲线已有2人参与

最近要用纳米材料的抗菌性，准备通过96孔板，用酶标仪测定抑制生长去点，每隔两小时测一次，以前人工取样测，太麻烦了，我想确定一下，一开始菌浓度要控制在多少？以及加样量？我要测24小时，会不会到最后菌很多，超出酶标仪范围，得不到曲线呢？ 望各位好心人指导一下下》。。
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1楼2013-04-16 15:30:33
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smallhorse88

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 莹莹陀zws at 2013-04-16 16:52:14
一般开始菌液浓度控制在10的4次方到5次方之间，不会的额，放心吧，再大仪器也读的出来。

那菌有要求么，比如是刚活化的，我的菌已经培养两天了，还能直接用来测？
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3楼2013-04-16 18:35:55
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smallhorse88

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by example at 2013-04-17 22:02:25
您好，我想请教MTT法测生长曲线您做过吗？我现在有荧光测度仪和荧光免疫分析仪两者都说可以测活菌数，，但是有问过一个工程师说是用应该免疫分析仪，，但是我现在荧光测读仪方便，，，请问有没有相关的经验呢...

不好意思，我没有做过呢》。
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6楼2013-04-18 09:53:48
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smallhorse88

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 莹莹陀zws at 2013-04-17 19:14:28
只要没有污染就可以的...

那加入量怎么确定呢，药液，和菌液一般怎么加啊？
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7楼2013-04-18 09:54:20
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smallhorse88

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 莹莹陀zws at 2013-04-18 18:38:55
先调菌液，药液加入量按照最终浓度算，你自己都不确定加多少吗...

我一般是先把菌稀释到我需要的浓度，比如10的六次方，在96孔板里面按照二倍稀释法稀释我的药液，第一孔是200ul原液，2以后是逐渐稀释的，然后每孔加100ul稀释好的菌液，这样的话不是药液又被稀释了么，菌液稀释了么，我这样做生长抑制曲线对不对啊...
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10楼2013-04-19 08:53:56
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smallhorse88

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 莹莹陀zws at 2013-04-18 18:38:55
先调菌液，药液加入量按照最终浓度算，你自己都不确定加多少吗...

我现在做的时候吧，先把药液稀释到需要的浓度，然后把菌液稀释，再分别取100uL加到孔板里面，这样的话，对于菌来讲，是不是培养基太少了，会不会营养不够，对结果造成影响啊...
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12楼2013-04-25 21:25:42
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smallhorse88

新虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by carrieskl at 2013-04-25 23:24:26
你是想在96孔板里培养然后到时间直接测吗？我觉得不大靠谱诶。。
培养24小时，100ul的培养基很可能不够。。
有的菌容易形成生物被膜，生物被膜在板底，测OD时会影响。。。
还有菌的量可能也会对耐药有影响，比如 ...

是呀，我们使用酶标仪直接测的呢...我就是不知道这样做行不行呢
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15楼2013-04-26 16:42:18
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