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我晴天一片

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[求助] 基因与载体连接转化后涂版长出了菌，提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？

基因与载体PET-28a连接转化后涂板长出了菌，挑单克隆后摇试管提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？是连接失败还是怎么回事？连接失败的原因是什么呢？

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1楼 2013-04-07 10:56:06

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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by shangming at 2013-04-07 11:12:34
用的是amp抗性的话，培养12h左右长出来的才是抗性菌落，时间再长amp抗性就失效了，然后就会长出很多卫星菌落，这些卫星菌落基本上不含质粒，所以你在抗性培养基中培养长不出来。

用的是卡纳的抗性，也有时间限制吗？

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7楼2013-04-07 13:28:30

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shangming

铜虫 (小有名气)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。生物版块欢迎你的无私奉献。 2013-04-07 11:53:02

用的是amp抗性的话，培养12h左右长出来的才是抗性菌落，时间再长amp抗性就失效了，然后就会长出很多卫星菌落，这些卫星菌落基本上不含质粒，所以你在抗性培养基中培养长不出来。

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2楼2013-04-07 11:12:34

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留小保

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

有可能连接失败有可能是提取质粒出问题

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人生若只如初见何事秋风悲画扇

3楼2013-04-07 11:22:31

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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

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★
我晴天一片(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:31:13

ls回答前至少看一下吧 pet28a的抗性是kan 没卫星菌落的
LZ可以的话先做个colony pcr预筛选下。

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4楼2013-04-07 11:23:00

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