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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WESTERN结果求助，膜的2头背景深。
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] WESTERN结果求助，膜的2头背景深。

同一蛋白，说明书上给的分子量是50-80KD,western做了2次，发现膜的2头背景深，一抗羊单克隆抗体，二抗是驴抗羊的（1：10000），结果见图，求解。(胶是15%的浓度，一抗二抗均购自Santa  Curz)

第一次.jpg



第2次_副本.jpg

[ Last edited by a83875785 on 2013-4-5 at 15:58 ]
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1楼2013-04-05 14:57:10
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-04-06 08:39:16
抗体残留呗,把用的东西全洗一遍,包括所有跑胶,转膜的东西,镊子等(相信你没用bare hand直接碰过膜).
再有blocking的时候让膜均匀泡在奶粉或BSA理, tween 20 千分0.5-1,别太多或太少,应该就不会有了.
应该就是个操作或者器具的问题,和抗体什么的没多大关系
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2楼2013-04-06 02:59:48
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-06 03:59:48
抗体残留呗,把用的东西全洗一遍,包括所有跑胶,转膜的东西,镊子等(相信你没用bare hand直接碰过膜).
再有blocking的时候让膜均匀泡在奶粉或BSA理, tween 20 千分0.5-1,别太多或太少,应该就不会有了.
应该就是个操作 ...

怎么做了2次都有抗体残留哦！
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3楼2013-04-08 12:25:38
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先就怀疑膜晃的不均匀
第二就是二抗洗干净没
膜比较脏，觉得没洗干净
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4楼2013-04-08 17:01:29
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