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细胞周期问题
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看了很多关于细胞周期的做法 我想请教各位 1、细胞消化要理想,资料显示最好消化时加EDTA,可使流式做的很漂亮; 2、细胞消化后不可吹打过度,减少细胞破碎;以后的吹打也要注意,尤其是固定后的细胞容易破碎; 3、 细胞用PBS洗涤离心,转速不超过1000r/min,有文献用800r/min;可考虑在此过程中用300目的尼龙网过滤一遍细胞(有人主张用钢网,以 减少细胞与尼龙网粘连的损失,本人认为钢网易损伤细胞,DNA外溢也会造成细胞粘连,所以在细胞数足够的情况下,首选尼龙网); 4、离心后的固定,标准做法是将细胞悬液加入预冷70%酒精,而不是向细胞中加酒精,这样是为了减少细胞聚集,这一点很重要,很多人都忽视了! 第四步骤中的 细胞悬液用什么吹打成悬液的呢?? 70%酒精还是啥呢???? |
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