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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】抗微管药物的体外筛选问题
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】抗微管药物的体外筛选问题

请教各位前辈，我正在做两个化合物的抗肿瘤药理研究，细胞增殖抑制上做出效果较好，但在细胞周期上没有做出结果，正在寻找其靶点，想在微管方面做一下，看它们有没有在微管方面有作用，目前查到的资料很少，具体归结为两类，一类是通过细胞免疫荧光拍照，一种是体外的模型筛选。

1.对于细胞免疫荧光方面，想求助一下详细的步骤和注意点，并想请高手指点一下对于肿瘤细胞株的选择有没要求，是不是细胞核大一点的更利于拍出比较好的照片。

2.对于体外模型的筛选，想寻求一下具体步骤和要点，查到的资料都是自己提取的微管蛋白，有的是在比色皿中测，有的是用96孔板测，但实验室没有提取的条件，不知道有没有试剂盒，包括纯的微管蛋白和缓冲液等，麻烦大家附上具体实验所需的主要仪器。

谢谢大家能抽空解答，不甚感激！
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1楼 2011-03-02 10:40:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-02 15:17:38
1、增殖上有效果？直接的实验证据是什么？
2、为什么想到细胞骨架？观察到细胞的形态和运动能力改变了吗？
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2楼2011-03-02 11:27:15
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 11:27:15:
1、增殖上有效果？直接的实验证据是什么？
2、为什么想到细胞骨架？观察到细胞的形态和运动能力改变了吗？

MTT和SRB两个细胞筛选上面都有结果，细胞周期和TOP酶抑制也都做了，没有明显结果，所以想到细胞骨架，Hoechst染色观察结果细胞形态在很低剂量的情况下就该改变了，之后想针对微管找靶点的，你有相关的信息吗？可以指点一下吗？
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3楼2011-03-02 12:49:06
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 继续鼓励 2011-03-02 15:17:59
1、MTT和SRB都不是增殖的直接证据。最直接的证据是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型变，比如固缩着色变亮，那是凋亡，不直接反映细胞骨架的问题

因此，你应该去研究凋亡
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4楼2011-03-02 14:35:54
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 14:35:54:
1、MTT和SRB都不是增殖的直接证据。最直接的证据是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型变，比如固缩着色变亮，那是凋亡，不直接反映细胞骨架的问题

因此，你应该去研究凋亡

凋亡已经做过，是有影响的，但老师说这是结果，不是机制，还是得找这个药物的靶点，所以才想去微管方面寻找，尝试一下是否是这个靶点。能否告诉我一下你的QQ或是手机号，感觉你是这方面的专家，想多向请教你一下。我的QQ是476617248.邮箱是bo_ting@126.com. 多谢！
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5楼2011-03-02 16:39:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 楼主的第一句~~很符合论坛的宗旨~~ 2011-03-02 18:44:51
引用回帖:
Originally posted by 孤岛浪客 at 2011-03-02 16:39:05:
凋亡已经做过，是有影响的，但老师说这是结果，不是机制，还是得找这个药物的靶点，所以才想去微管方面寻找，尝试一下是否是这个靶点。能否告诉我一下你的QQ或是手机号，感觉你是这方面的专家，想多向请教你一下 ...

呃……本人不接受私下解答……不好意思……还是发帖公开讨论比较好吧

凋亡机制方面我貌似以前都说过很多了
首先你应该去看，这个药物引起细胞哪个通路依赖性的凋亡（线粒体通路、死亡受体通路？）
测一下caspase-8和9的活性就知道是依赖于哪个通路或者有cross-talk

解决了这个问题再进一步讨论吧
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6楼2011-03-02 17:14:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励~~ 2011-03-02 18:45:09
孤岛浪客(金币+20): 2011-03-03 10:40:42
如果你要确诊确实是凋亡，光有hoechst一个证据是不够的
包括我刚才说的cas活性测定（要测个cas-3）在内
还得做个Annexin V/PI看看
多方面证据才能支撑凋亡

还要做LDH，看细胞都飘起来的时候LDH释放有没有很剧烈地增加，如果增加好多了，可能是凋亡和细胞毒双方面的机制

所以你要做的东西还很多很多
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7楼2011-03-02 17:16:37
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 孤岛浪客 at 2011-03-02 16:39:05:
凋亡已经做过，是有影响的，但老师说这是结果，不是机制，还是得找这个药物的靶点，所以才想去微管方面寻找，尝试一下是否是这个靶点。能否告诉我一下你的QQ或是手机号，感觉你是这方面的专家，想多向请教你一下 ...

没事儿，呵呵，我凋亡在A/V上做出有趋势，Cas-3有趋势，现在在做Bax、bcl-2，这个会继续做，但是凋亡上面解释最多只能说明一个通路，并不能说明这个化合物的真正的机制在哪方面，所以才想往微管方面做的，老师一直希望在微管上做，不希望在凋亡上做太深。
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8楼2011-03-02 18:07:33
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)
lstt09nk: 实验上的疑问，欢迎您来木虫生物版提问~~ 2011-03-02 18:46:24
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 17:14:15:
呃……本人不接受私下解答……不好意思……还是发帖公开讨论比较好吧

凋亡机制方面我貌似以前都说过很多了
首先你应该去看，这个药物引起细胞哪个通路依赖性的凋亡（线粒体通路、死亡受体通路？）
测一下c ...

要是你是我导师就好了，呵呵！
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9楼2011-03-02 18:08:40
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 孤岛浪客 at 2011-03-02 18:08:40:
要是你是我导师就好了，呵呵！

介个……大家平辈，相互交流吧~~
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10楼2011-03-02 23:00:24
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:26:53
引用回帖:
Originally posted by 孤岛浪客 at 2011-03-02 18:07:33:
没事儿，呵呵，我凋亡在A/V上做出有趋势，Cas-3有趋势，现在在做Bax、bcl-2，这个会继续做，但是凋亡上面解释最多只能说明一个通路，并不能说明这个化合物的真正的机制在哪方面，所以才想往微管方面做的，老师一 ...

如果想研究微管
直接证据那就去做激光共聚焦，有变就是有变，没变就是没变~~
但是，怎么说呢，骨架瓦解和凋亡，谁是鸡谁是蛋，在你这个模型中不好说
时效是得好好把握的，看谁先发生
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11楼2011-03-02 23:15:39
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jiangjinhuan

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 孤岛浪客 at 2011-03-02 16:39:05:
凋亡已经做过，是有影响的，但老师说这是结果，不是机制，还是得找这个药物的靶点，所以才想去微管方面寻找，尝试一下是否是这个靶点。能否告诉我一下你的QQ或是手机号，感觉你是这方面的专家，想多向请教你一下 ...

你好，请问你微管靶点方面的实验做得怎样了，因为我也想做这方面的研究，因为刚接触实验，很多不太懂，想向你请教一下。。。
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12楼2011-09-25 10:52:34
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l-c-l

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
偶有点疑问，细胞周期没结果，微管实验还需要做吗？一般抗微管直接影响细胞周期吧。不想在凋亡通路上做太深，可以从最近比较热的血管生成和转移做做。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2011-09-25 23:46:33
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shwkx1987

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，请问你微管靶点方面的实验进展怎样了。我们实验室也准备做细胞骨架，想向你请教
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14楼2012-06-12 15:38:11
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