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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】抗微管药物的体外筛选问题

请教各位前辈，我正在做两个化合物的抗肿瘤药理研究，细胞增殖抑制上做出效果较好，但在细胞周期上没有做出结果，正在寻找其靶点，想在微管方面做一下，看它们有没有在微管方面有作用，目前查到的资料很少，具体归结为两类，一类是通过细胞免疫荧光拍照，一种是体外的模型筛选。

1.对于细胞免疫荧光方面，想求助一下详细的步骤和注意点，并想请高手指点一下对于肿瘤细胞株的选择有没要求，是不是细胞核大一点的更利于拍出比较好的照片。

2.对于体外模型的筛选，想寻求一下具体步骤和要点，查到的资料都是自己提取的微管蛋白，有的是在比色皿中测，有的是用96孔板测，但实验室没有提取的条件，不知道有没有试剂盒，包括纯的微管蛋白和缓冲液等，麻烦大家附上具体实验所需的主要仪器。

谢谢大家能抽空解答，不甚感激！

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1楼 2011-03-02 10:40:39

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励~~ 2011-03-02 18:45:09
孤岛浪客(金币+20): 2011-03-03 10:40:42

如果你要确诊确实是凋亡，光有hoechst一个证据是不够的
包括我刚才说的cas活性测定（要测个cas-3）在内
还得做个Annexin V/PI看看
多方面证据才能支撑凋亡

还要做LDH，看细胞都飘起来的时候LDH释放有没有很剧烈地增加，如果增加好多了，可能是凋亡和细胞毒双方面的机制

所以你要做的东西还很多很多