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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】抗微管药物的体外筛选问题
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】抗微管药物的体外筛选问题

请教各位前辈，我正在做两个化合物的抗肿瘤药理研究，细胞增殖抑制上做出效果较好，但在细胞周期上没有做出结果，正在寻找其靶点，想在微管方面做一下，看它们有没有在微管方面有作用，目前查到的资料很少，具体归结为两类，一类是通过细胞免疫荧光拍照，一种是体外的模型筛选。

1.对于细胞免疫荧光方面，想求助一下详细的步骤和注意点，并想请高手指点一下对于肿瘤细胞株的选择有没要求，是不是细胞核大一点的更利于拍出比较好的照片。

2.对于体外模型的筛选，想寻求一下具体步骤和要点，查到的资料都是自己提取的微管蛋白，有的是在比色皿中测，有的是用96孔板测，但实验室没有提取的条件，不知道有没有试剂盒，包括纯的微管蛋白和缓冲液等，麻烦大家附上具体实验所需的主要仪器。

谢谢大家能抽空解答，不甚感激！
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1楼 2011-03-02 10:40:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励~~ 2011-03-02 18:45:09
孤岛浪客(金币+20): 2011-03-03 10:40:42
如果你要确诊确实是凋亡，光有hoechst一个证据是不够的
包括我刚才说的cas活性测定（要测个cas-3）在内
还得做个Annexin V/PI看看
多方面证据才能支撑凋亡

还要做LDH，看细胞都飘起来的时候LDH释放有没有很剧烈地增加，如果增加好多了，可能是凋亡和细胞毒双方面的机制

所以你要做的东西还很多很多
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7楼2011-03-02 17:16:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-02 15:17:38
1、增殖上有效果？直接的实验证据是什么？
2、为什么想到细胞骨架？观察到细胞的形态和运动能力改变了吗？
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2楼2011-03-02 11:27:15
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孤岛浪客

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 11:27:15:
1、增殖上有效果？直接的实验证据是什么？
2、为什么想到细胞骨架？观察到细胞的形态和运动能力改变了吗？

MTT和SRB两个细胞筛选上面都有结果，细胞周期和TOP酶抑制也都做了，没有明显结果，所以想到细胞骨架，Hoechst染色观察结果细胞形态在很低剂量的情况下就该改变了，之后想针对微管找靶点的，你有相关的信息吗？可以指点一下吗？
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3楼2011-03-02 12:49:06
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 继续鼓励 2011-03-02 15:17:59
1、MTT和SRB都不是增殖的直接证据。最直接的证据是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型变，比如固缩着色变亮，那是凋亡，不直接反映细胞骨架的问题

因此，你应该去研究凋亡
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4楼2011-03-02 14:35:54
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