应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞周期问题
51/1返回列表
查看: 998  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

7782663

铜虫 (正式写手)

[求助] 细胞周期问题

看了很多关于细胞周期的做法 我想请教各位
1、细胞消化要理想，资料显示最好消化时加EDTA，可使流式做的很漂亮；
2、细胞消化后不可吹打过度，减少细胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的细胞容易破碎；
3、 细胞用PBS洗涤离心，转速不超过1000r/min，有文献用800r/min；可考虑在此过程中用300目的尼龙网过滤一遍细胞（有人主张用钢网，以 减少细胞与尼龙网粘连的损失，本人认为钢网易损伤细胞，DNA外溢也会造成细胞粘连，所以在细胞数足够的情况下，首选尼龙网）；
4、离心后的固定，标准做法是将细胞悬液加入预冷70％酒精，而不是向细胞中加酒精，这样是为了减少细胞聚集，这一点很重要，很多人都忽视了！

第四步骤中的 细胞悬液用什么吹打成悬液的呢？？ 70％酒精还是啥呢？？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-02 16:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququ1105

银虫 (小有名气)
不好意思才看到楼主回复。不知实验做成没有？HepG2应该没有问题的呀。很泼辣的细胞。HepG2.2.15比较难养。
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-19 11:38:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ququ1105

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-02 19:40:20
7782663: 金币+1 2013-04-04 14:15:18
楼主不用担心，细胞周期是非常简单的实验，只要你的细胞正常，流式细胞仪也正常，基本上怎么做都能出结果的。70%乙醇是用来固定细胞的，让细胞停止在你固定的那个时候的周期。吹打成悬液的方法是，你离心倒掉上清再把管子正过来时底下肯定有剩余的PBS，用手磕匀就行了，就和你传细胞时离心管里细胞敲匀是一样的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-02 16:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ququ1105 at 2013-04-02 16:29:39
楼主不用担心，细胞周期是非常简单的实验，只要你的细胞正常，流式细胞仪也正常，基本上怎么做都能出结果的。70%乙醇是用来固定细胞的，让细胞停止在你固定的那个时候的周期。吹打成悬液的方法是，你离心倒掉上清再 ...

磕匀是指细胞成单个细胞吗，还是指大概细胞不成团块
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-04 14:14:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququ1105

银虫 (小有名气)
是否是单个细胞要看你消化的程度啦，如果消化不到时间或者消化过了的话细胞就会抱团，使劲用移液枪吹或者使劲磕只能把细胞吹得状态更差。至于成团块，我不知道楼主用的什么细胞啦，一般的细胞都不会抱团的，也没必要用滤网过就可以做出很漂亮的周期图。我印象中我实验室里只有hepG2.2.15貌似会抱团，做周期时要用滤网过滤一下，用的也是最普通的那种，分小鼠肝脾淋巴细胞用的250目铜网。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-04 19:08:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭