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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞周期问题
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7782663

铜虫 (正式写手)

[求助] 细胞周期问题

看了很多关于细胞周期的做法 我想请教各位
1、细胞消化要理想，资料显示最好消化时加EDTA，可使流式做的很漂亮；
2、细胞消化后不可吹打过度，减少细胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的细胞容易破碎；
3、 细胞用PBS洗涤离心，转速不超过1000r/min，有文献用800r/min；可考虑在此过程中用300目的尼龙网过滤一遍细胞（有人主张用钢网，以 减少细胞与尼龙网粘连的损失，本人认为钢网易损伤细胞，DNA外溢也会造成细胞粘连，所以在细胞数足够的情况下，首选尼龙网）；
4、离心后的固定，标准做法是将细胞悬液加入预冷70％酒精，而不是向细胞中加酒精，这样是为了减少细胞聚集，这一点很重要，很多人都忽视了！

第四步骤中的 细胞悬液用什么吹打成悬液的呢？？ 70％酒精还是啥呢？？？？
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1楼 2013-04-02 16:21:22
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7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ququ1105 at 2013-04-19 11:38:22
不好意思才看到楼主回复。不知实验做成没有？HepG2应该没有问题的呀。很泼辣的细胞。HepG2.2.15比较难养。

没做呢 成功了告诉你 呵呵
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7楼2013-04-20 13:07:58
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ququ1105

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-02 19:40:20
7782663: 金币+1 2013-04-04 14:15:18
楼主不用担心，细胞周期是非常简单的实验，只要你的细胞正常，流式细胞仪也正常，基本上怎么做都能出结果的。70%乙醇是用来固定细胞的，让细胞停止在你固定的那个时候的周期。吹打成悬液的方法是，你离心倒掉上清再把管子正过来时底下肯定有剩余的PBS，用手磕匀就行了，就和你传细胞时离心管里细胞敲匀是一样的。
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2楼2013-04-02 16:29:39
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7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ququ1105 at 2013-04-02 16:29:39
楼主不用担心，细胞周期是非常简单的实验，只要你的细胞正常，流式细胞仪也正常，基本上怎么做都能出结果的。70%乙醇是用来固定细胞的，让细胞停止在你固定的那个时候的周期。吹打成悬液的方法是，你离心倒掉上清再 ...

磕匀是指细胞成单个细胞吗，还是指大概细胞不成团块
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3楼2013-04-04 14:14:59
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ququ1105

银虫 (小有名气)
是否是单个细胞要看你消化的程度啦，如果消化不到时间或者消化过了的话细胞就会抱团，使劲用移液枪吹或者使劲磕只能把细胞吹得状态更差。至于成团块，我不知道楼主用的什么细胞啦，一般的细胞都不会抱团的，也没必要用滤网过就可以做出很漂亮的周期图。我印象中我实验室里只有hepG2.2.15貌似会抱团，做周期时要用滤网过滤一下，用的也是最普通的那种，分小鼠肝脾淋巴细胞用的250目铜网。
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4楼2013-04-04 19:08:31
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