应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR与普通PCR
51/1返回列表
查看: 2291  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR与普通PCR

我们实验室做检测时都是先用普通PCR检测，看着条带好再用实时定量检测，有一个基因在琼脂糖凝胶上看着条带是单一的，为什么在做荧光定量的时候溶解曲线是这样的呢？请大家多多帮助，十分感谢~~~
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : BYA`_KCCRF43O9(@_JYQ)NX.jpg
    • 2013-04-02 15:21:16, 54.8 K
  • 附件 2 : GCV@Y9FJW8ZIU43XNFJ%V.jpg
    • 2013-04-02 15:21:22, 48.47 K

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
如果不努力，肯定没收获！
1楼2013-04-02 15:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-02 15:38:08
普通PCR检测灵敏度比荧光定量差很多。能看到条带时早就过了荧光定量的检测限。所以，即使普通PCR上是一条带，不一定说明荧光定量时候效果就很好。此外，荧光定量的酶和体系与普通PCR的不一样，普通PCR优化的最佳退火 ...

嗯，就是说如果荧光定量的溶解曲线不好，就是效果不好，普通PCR那个其实不能说明什么问题啊
还有一个问题就是，我的看家基因普通PCR后，在4%的琼脂糖凝胶上显示两条带，我的目的基因是80bp左右的，还有一条在60bp左右，但是在荧光定量上的溶解曲线显示挺好的，这样是不是就没有问题?
赞一下 回复此楼
如果不努力，肯定没收获！
3楼2013-04-02 18:16:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-02 19:19:26
普通PCR检测灵敏度比荧光定量差很多。能看到条带时早就过了荧光定量的检测限。所以，即使普通PCR上是一条带，不一定说明荧光定量时候效果就很好。此外，荧光定量的酶和体系与普通PCR的不一样，普通PCR优化的最佳退火温度与荧光定量时未必一样。感觉你需要优化荧光定量PCR的反应程序。如果实在不行的话，说明可能需要更换引物。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

没入尘埃5
2楼2013-04-02 15:38:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
没入尘埃5: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-03 09:02:03
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-05 13:26:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2013-04-02 18:16:32
嗯，就是说如果荧光定量的溶解曲线不好，就是效果不好，普通PCR那个其实不能说明什么问题啊
还有一个问题就是，我的看家基因普通PCR后，在4%的琼脂糖凝胶上显示两条带，我的目的基因是80bp左右的，还有一条在60bp ...

做荧光定量一般不看普通PCR的效果，的确是因为普通PCR结果好也根本不说明什么问题。但是，如果普通PCR显示有两条带，说明产物不单一，应该算是有问题吧。不知道你说的应该定量的熔接曲线好是什么意思。我觉得一般情况下普通PCR能P出两条带的话，荧光定量的熔接曲线应该很难是单一的锐峰。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

没入尘埃5
4楼2013-04-02 22:32:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-02 22:32:39
做荧光定量一般不看普通PCR的效果，的确是因为普通PCR结果好也根本不说明什么问题。但是，如果普通PCR显示有两条带，说明产物不单一，应该算是有问题吧。不知道你说的应该定量的熔接曲线好是什么意思。我觉得一般情 ...

因为我的条带是80bp左右的，另一条在60bp左右，60的是不是就是引物二聚体了？溶解曲线是一个很高的单峰，我不知道怎么往这上面贴图，传了也看不见
赞一下 回复此楼
如果不努力，肯定没收获！
5楼2013-04-03 09:01:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭