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yuguiyan至尊木虫 (文坛精英)
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[求助]
荧光定量PCR引物设计的要求
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| 荧光定量PCR引物设计要求primer-blast的结果特异性很好吗？具体有什么要求，本人新手，只会设计PCR引物，望高手赐教！另外想知道荧光定量96孔板应该如何布局，有空白对照组，阴性对照组和处理组 |
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 分子生化实验经验积累 |
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励新虫发贴交流！ 2013-04-02 20:36:48
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qPCR 的引物基本要求与一般PCR的要求差不多，产物长度一般在80-150bp。对特异性的要求比较高，通常引物设计软件给出的结果也需要实验的具体优化，做standard curve看引物的扩增效率，melt curve中一个峰的话，引物特异性一般比较好。另外引物的Ta 也要考虑所用的qPCR酶的相关温度。 96孔板中有control cDNA + reference gene primer, control cDNA + target gene primer, treatment cDNA + reference gene primer 和 treatment cDNA + target gene primer 这样的组合，另外要有像lz说的 no RT control, negative control. 另外也与所选用的定量方法有关，absolute quantification或是relative quantification. 希望以上有帮助。 |
2楼2013-04-02 00:14:49
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