应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 求教血浆样品进HPLC前处理过程
111/2返回列表12下一页
查看: 2867  |  回复: 10
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

饺子813

铜虫 (小有名气)

[求助] 求教血浆样品进HPLC前处理过程

用HPLC测血浆药物浓度，预计待测浓度在100ng——4000ng之间。
之前用的血浆处理方法是这样的：
取100ul血浆样品，加50ul内标，850ul甲醇————混匀1min——离心10min————取上清————过滤进样（每次进样20ul）。【我用的流动相是乙腈和水，标准样品是用甲醇配制的。】
结果出来高中低三个浓度的回收率呈递减趋势，相差很大，低浓度大概有50%~60%。然后看文献上的血样处理方式好像是有这样的：
取400ul血浆样品，加20ul内标，加5ml混合萃取剂————混匀、离心各10min——取上清氮气吹干——100ul流动相复溶进样。
我的问题是：
1、氮气吹干再复溶的目的是为了浓缩吗？这一步对提高回收率有什么作用吗？用上述文献中方法处理之后，是不是相当于将原来400ul里的药物浓缩到最后100ul中（理想中），就是浓度变成了4倍吗？
2、我取的血浆样品只有100ul，而且最后用100ul流动相复溶的话实在太少了，我用的进样瓶是1ml的，100ul刚盖过瓶底，针头吸不到样品。我想在原来用甲醇萃取一遍之后，再加一些甲醇混匀提取一次，这样会不会回收率能高些？
3、请教各位大神有没有更好、更简单的处理方法？我做的血样大概有400多个。。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-04-01 10:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weantony

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你进样使用内插管，这样更小的复溶体积都可以，价格不贵的，几十块钱一包一两百个，塑料的；你的定量下限是多少阿
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

饺子813
6楼2013-04-01 14:44:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lmxc_sx

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
氮气吹干的目的是为了去除有机相中的杂质，你复溶的时候还是可以加400ul，选取合适进样量就可以了，但是稀释倍数和定量下线一定要搞清楚。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-01 11:21:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饺子813

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lmxc_sx at 2013-04-01 11:21:56
氮气吹干的目的是为了去除有机相中的杂质，你复溶的时候还是可以加400ul，选取合适进样量就可以了，但是稀释倍数和定量下线一定要搞清楚。

稀释倍数这个问题我还真是没搞明白。。。
假设我原先的血浆样品浓度是400ng/ml,取400ul样品，加50ul内标，加5ml萃取剂，混匀离心×××××，最后用400ul流动相复溶，那么最终样品被稀释了几倍(假定药物没有损失)？我觉得浓度不变啊......开始400，最后还是400.....这样理解对不对？
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-01 12:21:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxaijwd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
饺子813: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 非常感谢你的帮助！ 2013-04-08 09:22:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by 饺子813 at 2013-04-01 12:21:01
稀释倍数这个问题我还真是没搞明白。。。
假设我原先的血浆样品浓度是400ng/ml,取400ul样品，加50ul内标，加5ml萃取剂，混匀离心×××××，最后用400ul流动相复溶，那么最终样品被稀释了几倍(假定药物没有损失) ...

氮气吹干一方面是为了除去有机相（萃取时一般都是二氯甲烷、乙醚等有机相，一般不会直接把这些进柱子），另外，如果复溶体积和开始时血浆体积不同，也能起到浓缩的作用，比如400微升血浆，最后复溶到100微升，就是浓缩了4倍，更利于样品的检测，但是你用400微升复溶就没有浓缩倍数了。如果讲简单的样品前处理的话，对于常规方法没有什么好办法的，甲醇/乙腈沉淀蛋白样品处理时间已经很短了，但是样品相对液液萃取脏一些，对柱子不好。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-01 12:29:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxaijwd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

此外，如果你的定量限不够的话，可以适当提高进样量，比如你进40微升，就相当于提高一倍了啊。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

饺子813
5楼2013-04-01 12:30:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饺子813

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by xxaijwd at 2013-04-01 12:30:46
此外，如果你的定量限不够的话，可以适当提高进样量，比如你进40微升，就相当于提高一倍了啊。

提高进样量   嗯 是个好办法  多谢指教啦！
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-01 15:03:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饺子813

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by weantony at 2013-04-01 14:44:58
建议你进样使用内插管，这样更小的复溶体积都可以，价格不贵的，几十块钱一包一两百个，塑料的；你的定量下限是多少阿

定量下限什么的我没有具体测过，只是大体比较了一下S/N=10的峰高和线性范围的下限，我觉得应该能测出来......
能否请教下您内插管从哪里买？发个链接可以吗？谢谢啦！
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-01 15:06:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weantony

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 饺子813 at 2013-04-01 15:06:10
定量下限什么的我没有具体测过，只是大体比较了一下S/N=10的峰高和线性范围的下限，我觉得应该能测出来......
能否请教下您内插管从哪里买？发个链接可以吗？谢谢啦！...

可能是你的提取溶剂选取的不好 换换别的提取溶剂试试看吧 你直接找你们实验室买塑料离心管的耗材商就行了 他们肯定有的 塑料的不一定有 如果实在没有你可以买国产塑料的pcr管 200ul的那种 把盖子剪掉就可以用了 大小正合适 你可以让耗材商给你送几个样品试试看
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-01 15:41:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星的眼睛

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 饺子813 at 2013-04-01 12:21:01
稀释倍数这个问题我还真是没搞明白。。。
假设我原先的血浆样品浓度是400ng/ml,取400ul样品，加50ul内标，加5ml萃取剂，混匀离心×××××，最后用400ul流动相复溶，那么最终样品被稀释了几倍(假定药物没有损失) ...

你这个理解是对的。你提到的两种方法都可以用来处理血样，处理血样的目的就是除去蛋白，并且保证药物浓度可定量；你的回收率较低的话，你试试加大混合的时间和强度，怀疑你药物可能没有完全溶出来；还有就是你看看你你的回收率计算方法是否有错误
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-02 10:25:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 饺子813 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 为何全世界都用JCR分区，咱们要弄个中科院分区？意义何在？ +5 意得辑_editage 2024-06-25 6/300 2024-06-27 17:30 by chemhua
[考博] 论文被硕导卡 +5 自强不息a?a 2024-06-26 8/400 2024-06-27 17:09 by 自强不息a?a
[基金申请] 第75批博后面上 “应该是这两周”基金管理处的电话终于通了 +4 makele123 2024-06-27 5/250 2024-06-27 16:45 by fang大大
[育儿交流] 暑假孩子一个人在家可以干什么 +9 唠叨的映 2024-06-25 10/500 2024-06-27 16:12 by 水冰月月野兔
[基金申请] 国基在研影响申请结果吗 +14 WOWO159357 2024-06-26 22/1100 2024-06-27 15:36 by lucky_my2010
[基金申请] 请问三个字的中文名字，在文中到底怎么表示？ 5+3 zhongyuan764 2024-06-22 7/350 2024-06-27 11:28 by f1yfish
[硕博家园] 联培博士文章第一单位署名问题交流~ +10 橙成成c 2024-06-23 23/1150 2024-06-27 10:11 by 橙成成c
[基金申请] 自然基金变化？？ +15 今晚推荐22 2024-06-21 25/1250 2024-06-26 19:40 by 朋友别哭010
[基金申请] 博后面上和特助今天出吗？ +41 逗您玩 2024-06-21 78/3900 2024-06-26 16:00 by HAPPY_0225
[基金申请] 青年基金E02口青基去年几个函评专家？ +6 他山攻玉之石 2024-06-25 9/450 2024-06-26 15:09 by 他山攻玉之石
[有机交流] 酚羟基甲基化 10+4 A好运来啦啦啦 2024-06-25 6/300 2024-06-26 10:08 by 88817753
[硕博家园] 申博雅思求助 +6 刘嘉研究究 2024-06-24 7/350 2024-06-26 07:08 by 小李醒yy
[基金申请] 厅级项目出校却没中 +13 Iwould 2024-06-23 20/1000 2024-06-26 06:14 by foolishmani
[基金申请] 博后面上到底什么时候出结果？？？ +7 爱学lsy 2024-06-24 7/350 2024-06-25 19:24 by 暴走的蒜泥
[基金申请] 能看出是否上会了吗 +10 articlefan 2024-06-23 15/750 2024-06-25 16:05 by 请慎重修改昵称
[教师之家] 复旦夏同学退学理由说明，哪儿可以下载？ +7 苏东坡二世 2024-06-21 8/400 2024-06-25 12:42 by 药嘿1233
[教师之家] 有没有今年的影响因子？ +6 jurkat.1640 2024-06-22 10/500 2024-06-24 22:48 by 潇湘之迷
[基金申请] 青年和面上，哪个上会难度更大 +12 今晚推荐22 2024-06-21 18/900 2024-06-24 11:08 by 半简体
[基金申请] 国自然青年基金，1A4B能上会吗？青年和面上的上会标准是一样的吗？ +19 今晚推荐22 2024-06-20 32/1600 2024-06-23 23:17 by andywei1028
[基金申请] 听大佬说今年信息口本子数量大幅增加？ +8 wutzxt 2024-06-21 9/450 2024-06-21 19:58 by wutzxt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭