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求教血浆样品进HPLC前处理过程
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用HPLC测血浆药物浓度，预计待测浓度在100ng——4000ng之间。 之前用的血浆处理方法是这样的： 取100ul血浆样品，加50ul内标，850ul甲醇————混匀1min——离心10min————取上清————过滤进样（每次进样20ul）。【我用的流动相是乙腈和水，标准样品是用甲醇配制的。】 结果出来高中低三个浓度的回收率呈递减趋势，相差很大，低浓度大概有50%~60%。然后看文献上的血样处理方式好像是有这样的： 取400ul血浆样品，加20ul内标，加5ml混合萃取剂————混匀、离心各10min——取上清氮气吹干——100ul流动相复溶进样。 我的问题是： 1、氮气吹干再复溶的目的是为了浓缩吗？这一步对提高回收率有什么作用吗？用上述文献中方法处理之后，是不是相当于将原来400ul里的药物浓缩到最后100ul中（理想中），就是浓度变成了4倍吗？ 2、我取的血浆样品只有100ul，而且最后用100ul流动相复溶的话实在太少了，我用的进样瓶是1ml的，100ul刚盖过瓶底，针头吸不到样品。我想在原来用甲醇萃取一遍之后，再加一些甲醇混匀提取一次，这样会不会回收率能高些？ 3、请教各位大神有没有更好、更简单的处理方法？我做的血样大概有400多个。。。。。。 |
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氮气吹干一方面是为了除去有机相（萃取时一般都是二氯甲烷、乙醚等有机相，一般不会直接把这些进柱子），另外，如果复溶体积和开始时血浆体积不同，也能起到浓缩的作用，比如400微升血浆，最后复溶到100微升，就是浓缩了4倍，更利于样品的检测，但是你用400微升复溶就没有浓缩倍数了。如果讲简单的样品前处理的话，对于常规方法没有什么好办法的，甲醇/乙腈沉淀蛋白样品处理时间已经很短了，但是样品相对液液萃取脏一些，对柱子不好。 |
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