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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做western的时候胶片总是很脏是怎么回事~~
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马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[求助] 做western的时候胶片总是很脏是怎么回事~~

我最近在做western blot，但是在显色的时候胶片总是很脏，不像是背景太重的样子，会不会是我操作笨拙多胶片造成了伤害啊~~
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1楼 2013-03-29 19:42:22
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秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 欢迎老新虫发帖，以后常来 2013-03-30 08:55:37
是不是一抗没洗干净
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认真过好每一天！
2楼2013-03-29 20:33:15
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-03-30 08:55:09
5% milk block overnight,  one more wash after the primary and secondary antibody wash, or lower the primary and secondary antibody dose might can solve this problem.
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immunologyparasite
3楼2013-03-29 21:52:01
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shaoxin816

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-02 08:18:12
没洗干净。tbst多洗
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4楼2013-03-30 09:39:29
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thendlee

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-02 08:18:00
试试把tbst过滤一下吧，以前我们这样弄过 出来之后很干净
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5楼2013-04-01 08:39:42
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蓝天_1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-04-02 08:19:12
可能是定影液、显影液、水用的时间长了，需要更换了；在或者片子本身就脏吧。
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6楼2013-04-01 09:14:00
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遥控器68

金虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 有道理 2013-04-02 08:19:00
给个图片看看吧 一个脏字也想不出什么样子啊
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7楼2013-04-01 10:21:18
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Rene333

铁虫 (初入文坛)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-02 08:18:46
洗的时间长一点看一下，曾经遇到过背景很脏，但洗时间延长后来背景就干净了。我一般一抗要洗多余1个小时，二抗要洗多余1个小时。
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8楼2013-04-01 14:30:28
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gao809

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

少加点二抗，多洗洗，或者把TBST中的Tween浓度提高
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9楼2013-04-01 19:50:26
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