24小时热门版块排行榜    

查看: 598  |  回复: 3
【悬赏金币】回答本帖问题,作者hf2016将赠送您 100 个金币

hf2016

金虫 (正式写手)

[求助] western已有2人参与

最近做的western在hrp曝光时,一直是曝光两分钟有条带,四分钟条带变弱,十分钟甚至再延长时间就没有条带了请问这是什么原因? 我用的是thermo的发光液,一抗用的是cst和康为世纪的his标签抗体,稀释倍数为1:2000至1:3000;二抗为promega 的鼠抗和兔抗,稀释倍数试过10000倍和5000倍,之前用10000倍稀释用着一直挺好使的。显影液和定影液用过碧云天的以及国产的显影粉新配的都是这样的结果。
求赐教!
回复此楼
一切开始于结束之后
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高?②ECL有问题?ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头,导致AB液之间有污染,容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放,用的时候要严格避光的。③发光过程中使用的东西和操作有无变化。荧光较敏感,保鲜膜干净否,操作过程中镊子干净否,是否碰到荧光,或者其他吧。④实验室有人曝光时把红光调太亮,感觉也会淬灭。我还没调太亮过。感觉ECL质量或者污染出问题的概率一般大一些。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-04-21 22:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hf2016

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 22:48:59
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高?②ECL有问题?ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头,导致AB液之间有污染,容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放,用的时候要严格避光的 ...

二抗的浓度高了也会有影响吗?
一切开始于结束之后
3楼2014-04-22 08:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是操作过程中出现了污染,所以导致荧光淬灭问题,我们也遇到过,把所有的试剂重新配置,用到的封口杂交袋保证是干净的,就没问题了
4楼2014-04-22 15:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hf2016 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 去英国的小伙伴儿都在哪儿租的房子呀? +3 65syn 2024-06-14 4/200 2024-06-17 11:24 by 爱吃菜的虫
[基金申请] 最新消息:2024国自然下载文件名变了 +12 dream200606 2024-06-16 23/1150 2024-06-17 11:24 by dream200606
[教师之家] 请问事业编制和年薪制冲突吗? +9 ZHONGWU_U 2024-06-14 9/450 2024-06-17 11:20 by zqs3916
[基金申请] 我标书代码变了 +36 学员NHuqdk 2024-06-16 50/2500 2024-06-17 11:07 by ECOblance
[考博] 34岁读博士晚吗 +28 emitdne 2024-06-13 28/1400 2024-06-17 09:51 by shl2112501
[找工作] 成都产品质量检测研究院 200+3 鲸鱼663 2024-06-11 10/500 2024-06-17 08:31 by yudaoqian88
[找工作] 江西双非一本和四川双一流高校如何选择? 5+8 寒山敲钟 2024-06-12 25/1250 2024-06-16 22:05 by zhaojiang427
[教师之家] 饶议:什么制度能保障大学普通教师不用为领导拎包,不用看领导脸色 +9 zju2000 2024-06-12 15/750 2024-06-16 20:45 by 北溟鱼1318
[基金申请] 希望今年自己国自然面上项目和老婆青年项目能中! +7 恐龙爸爸 2024-06-14 7/350 2024-06-16 14:48 by redfish105
[基金申请] 博后基金,博管会会提前知道消息吗? +4 yuyiang 2024-06-13 4/200 2024-06-16 11:40 by yangyuzhong4
[考博] 上海交大招收材料化学方向科研助理/“申请考核”博士(请勿回复帖子或站内投条) +3 灵梦and紫 2024-06-12 4/200 2024-06-15 20:58 by 1822836277
[基金申请] 有没有机械的前辈分享一下评上海优都是什么成果啊 +7 wulala800 2024-06-10 7/350 2024-06-15 09:33 by 晓目崇
[论文投稿] 投了一篇4区的SCI,审稿人一个拒稿,一个小修,编辑给了大修。 +9 安稳22123 2024-06-13 10/500 2024-06-14 23:45 by jurkat.1640
[基金申请] 工材E口JQ有消息了吗 +4 babyduck 2024-06-11 4/200 2024-06-14 17:23 by firepick
[考博] 申博找导师 +4 疏影横斜水清浅3 2024-06-13 6/300 2024-06-14 14:31 by zxl_1105
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[论文投稿] 投稿kbs被拒后,系统提供的推荐的其他期刊有用吗? +3 chenrui2015 2024-06-10 3/150 2024-06-14 10:30 by Tr.sjx1997
[硕博家园] 科研求助 +5 杲www 2024-06-12 6/300 2024-06-13 16:16 by 姓李名明
[硕博家园] 机械研究生如何拿到年薪40+w +13 阿巴阿巴哦哦 2024-06-11 15/750 2024-06-13 15:40 by 113745685
[考博] 博导选择 +3 bing85977 2024-06-12 3/150 2024-06-13 15:34 by 我是邱尧
信息提示
请填处理意见