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hf2016

金虫 (正式写手)

[求助] western 已有2人参与

最近做的western在hrp曝光时，一直是曝光两分钟有条带，四分钟条带变弱，十分钟甚至再延长时间就没有条带了请问这是什么原因？ 我用的是thermo的发光液，一抗用的是cst和康为世纪的his标签抗体，稀释倍数为1：2000至1：3000；二抗为promega 的鼠抗和兔抗，稀释倍数试过10000倍和5000倍，之前用10000倍稀释用着一直挺好使的。显影液和定影液用过碧云天的以及国产的显影粉新配的都是这样的结果。
求赐教！
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一切开始于结束之后
1楼 2014-04-21 21:48:38
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高？②ECL有问题？ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头，导致AB液之间有污染，容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放，用的时候要严格避光的。③发光过程中使用的东西和操作有无变化。荧光较敏感，保鲜膜干净否，操作过程中镊子干净否，是否碰到荧光，或者其他吧。④实验室有人曝光时把红光调太亮，感觉也会淬灭。我还没调太亮过。感觉ECL质量或者污染出问题的概率一般大一些。
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hf2016
2楼2014-04-21 22:48:59
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hf2016

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 22:48:59
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高？②ECL有问题？ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头，导致AB液之间有污染，容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放，用的时候要严格避光的 ...

二抗的浓度高了也会有影响吗？
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一切开始于结束之后
3楼2014-04-22 08:53:59
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是操作过程中出现了污染，所以导致荧光淬灭问题，我们也遇到过，把所有的试剂重新配置，用到的封口杂交袋保证是干净的，就没问题了
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4楼2014-04-22 15:55:05
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