24小时热门版块排行榜    

查看: 830  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hf2016

金虫 (正式写手)

[求助] western 已有2人参与

最近做的western在hrp曝光时,一直是曝光两分钟有条带,四分钟条带变弱,十分钟甚至再延长时间就没有条带了请问这是什么原因? 我用的是thermo的发光液,一抗用的是cst和康为世纪的his标签抗体,稀释倍数为1:2000至1:3000;二抗为promega 的鼠抗和兔抗,稀释倍数试过10000倍和5000倍,之前用10000倍稀释用着一直挺好使的。显影液和定影液用过碧云天的以及国产的显影粉新配的都是这样的结果。
求赐教!
回复此楼

» 猜你喜欢

一切开始于结束之后
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hf2016

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 22:48:59
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高?②ECL有问题?ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头,导致AB液之间有污染,容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放,用的时候要严格避光的 ...

二抗的浓度高了也会有影响吗?
一切开始于结束之后
3楼2014-04-22 08:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高?②ECL有问题?ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头,导致AB液之间有污染,容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放,用的时候要严格避光的。③发光过程中使用的东西和操作有无变化。荧光较敏感,保鲜膜干净否,操作过程中镊子干净否,是否碰到荧光,或者其他吧。④实验室有人曝光时把红光调太亮,感觉也会淬灭。我还没调太亮过。感觉ECL质量或者污染出问题的概率一般大一些。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-04-21 22:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是操作过程中出现了污染,所以导致荧光淬灭问题,我们也遇到过,把所有的试剂重新配置,用到的封口杂交袋保证是干净的,就没问题了
4楼2014-04-22 15:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 272求调剂 +3 材紫有化 2026-02-28 3/150 2026-02-28 22:52 by ms629
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
信息提示
请填处理意见