24小时热门版块排行榜    

查看: 978  |  回复: 3

hf2016

金虫 (正式写手)

[求助] western 已有2人参与

最近做的western在hrp曝光时,一直是曝光两分钟有条带,四分钟条带变弱,十分钟甚至再延长时间就没有条带了请问这是什么原因? 我用的是thermo的发光液,一抗用的是cst和康为世纪的his标签抗体,稀释倍数为1:2000至1:3000;二抗为promega 的鼠抗和兔抗,稀释倍数试过10000倍和5000倍,之前用10000倍稀释用着一直挺好使的。显影液和定影液用过碧云天的以及国产的显影粉新配的都是这样的结果。
求赐教!
回复此楼
一切开始于结束之后
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高?②ECL有问题?ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头,导致AB液之间有污染,容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放,用的时候要严格避光的。③发光过程中使用的东西和操作有无变化。荧光较敏感,保鲜膜干净否,操作过程中镊子干净否,是否碰到荧光,或者其他吧。④实验室有人曝光时把红光调太亮,感觉也会淬灭。我还没调太亮过。感觉ECL质量或者污染出问题的概率一般大一些。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-04-21 22:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hf2016

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 22:48:59
这个应该是荧光淬灭问题。有可能是①二抗浓度过高?②ECL有问题?ECL试剂盒应该有A液和B液。在取A液和B液的时候如果忘了换枪头,导致AB液之间有污染,容易造成荧光淬灭的。我的ECL是在4度存放,用的时候要严格避光的 ...

二抗的浓度高了也会有影响吗?
一切开始于结束之后
3楼2014-04-22 08:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是操作过程中出现了污染,所以导致荧光淬灭问题,我们也遇到过,把所有的试剂重新配置,用到的封口杂交袋保证是干净的,就没问题了
4楼2014-04-22 15:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hf2016 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 听说今天filecode变了 +25 布布和一二 2026-08-06 48/2400 2026-08-11 11:37 by since—2010
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +5 布布和一二 2026-08-10 6/300 2026-08-11 10:15 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +15 Lanmanbaby 2026-08-09 23/1150 2026-08-11 09:51 by demonstreets
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见