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zkyysmzl2lwj

金虫 (正式写手)

[求助] p-erk做western时显影后没条带

做P-ERK 的western,用丽春红染色有五条带,显影时只有其中2条带,
上样量80ug
电泳下胶恒压120V
转膜恒流300mA 电压:80-110V波动,转膜时间50min
封闭:5%BSA
1抗:过夜 CST1:1000 3%BSA(用回收的1抗敷动物组织,western可以做出来)
洗1抗:10min*3次
2抗:常温下2h  CST赠品 1:1000 3%BSA
洗2抗:6min*5次
显影:ECL  要6分钟以上才出来,而且很不清晰
内参GAPDH只要40秒就出来了
求助~

P-ERK-2-9MIN.jpg
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-29 16:04:36
如果用丽春红染色可以看到的话,应该是可以显出来的,而且其他的两个条带显出来了,我感觉也不是一抗的问题,这个Western真心是有点邪乎
2楼2012-10-29 15:13:30
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zkyysmzl2lwj

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-10-29 15:13:30
如果用丽春红染色可以看到的话,应该是可以显出来的,而且其他的两个条带显出来了,我感觉也不是一抗的问题,这个Western真心是有点邪乎

是啊,做了好久了
上面图标的显出两条,为什么有两条现出来,另外三条就是没得,而下面的那个就是显出四条,还有一条没得
这是两张图合在一起的
3楼2012-10-29 15:29:02
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