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zkyysmzl2lwj

金虫 (正式写手)

[求助] p-erk做western时显影后没条带

做P-ERK 的western，用丽春红染色有五条带，显影时只有其中2条带，
上样量80ug
电泳下胶恒压120V
转膜恒流300mA 电压：80-110V波动，转膜时间50min
封闭：5%BSA
1抗：过夜 CST1:1000 3%BSA（用回收的1抗敷动物组织，western可以做出来）
洗1抗：10min*3次
2抗：常温下2h  CST赠品 1:1000 3%BSA
洗2抗：6min*5次
显影：ECL  要6分钟以上才出来，而且很不清晰
内参GAPDH只要40秒就出来了
求助~

P-ERK-2-9MIN.jpg
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1楼 2012-10-25 18:43:14
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-29 16:04:36
如果用丽春红染色可以看到的话，应该是可以显出来的，而且其他的两个条带显出来了，我感觉也不是一抗的问题，这个Western真心是有点邪乎
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2楼2012-10-29 15:13:30
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zkyysmzl2lwj

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-10-29 15:13:30
如果用丽春红染色可以看到的话，应该是可以显出来的，而且其他的两个条带显出来了，我感觉也不是一抗的问题，这个Western真心是有点邪乎

是啊，做了好久了
上面图标的显出两条，为什么有两条现出来，另外三条就是没得，而下面的那个就是显出四条，还有一条没得
这是两张图合在一起的
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3楼2012-10-29 15:29:02
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