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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有谁用过pETDuet-1，交流下
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山水88

木虫 (正式写手)

[交流] 有谁用过pETDuet-1，交流下

最近用pETDuet-1构建的质粒在做表达时几乎没有明显条带，不知道怎么回事呢，菌株BW25113用溶源化试剂盒已DE3化，质粒测序无误，表达条件25度，IPTG1mM，请教下有用过这个质粒做表达的大侠，帮我分析下可能原因，谢谢了
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1楼 2013-03-22 15:48:47
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
我们实验室之前有人用过，但是表达以后跑了蛋白电泳发现和对照一样，就没做了。
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2楼2013-03-22 16:29:17
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wtli

新虫 (初入文坛)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
这个载体表达水平一般，而且两个MCS还会有表达不均一的情况，IPTG0.5，28度又到过夜试一试
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3楼2013-03-22 16:43:41
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福~~~~~~
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6楼2013-03-22 23:41:49
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
看到文献上有用的，好像还不错，自己没用过
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8楼2013-03-23 17:57:57
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
表达量好像很低，但是没有做过表达，做过共转化
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9楼2013-03-24 12:09:14
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
也在用。。。
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10楼2013-03-24 14:19:22
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山水88

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-03-24 12:09:14
表达量好像很低，但是没有做过表达，做过共转化

之前用BL21（DE3）做表达出现过大量表达，现在就没有这种现象了，所以不知道其中有什么需要注意的不
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11楼2013-03-24 15:20:06
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山水88

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by alicelchf at 2013-03-24 14:19:22
也在用。。。

加油
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12楼2013-03-24 15:20:23
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
山水88(金币+1): 谢谢参与
质粒没什么特别的，同样是t7启动子，拷贝数同PET系列，只不过有两个MCS。我觉得不是质粒的原因，可能是你DE3溶原没有做好，你溶原后有没有做过其他表达看看啊？比如以前在BL（DE3）中表达相当好的质粒，在你新的溶原菌里面表达，效果如何？
我做过DE3溶原，说实话，效果不咋的。
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13楼2013-03-25 16:28:57
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山水88

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by susizheng at 2013-03-25 16:28:57
质粒没什么特别的，同样是t7启动子，拷贝数同PET系列，只不过有两个MCS。我觉得不是质粒的原因，可能是你DE3溶原没有做好，你溶原后有没有做过其他表达看看啊？比如以前在BL（DE3）中表达相当好的质粒，在你新的溶原 ...

好的，非常感谢，我再把溶源化的菌株用试剂盒验证下试试，不行就用BL21做了。
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14楼2013-03-25 17:09:51
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Rora_123

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主后来表达怎样？
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15楼2017-07-01 21:06:41
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piaolilin

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
选用的酶切位点是？是不是移码突变了
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16楼2020-03-13 13:36:58
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fyz72324楼
2013-03-22 20:11   回复  
山水88(金币+1): 谢谢参与
licong95275楼
2013-03-22 20:42   回复  
山水88(金币+1): 谢谢参与
haixiawu7楼
2013-03-23 00:02   回复  
山水88(金币+1): 谢谢参与
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