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山水88

木虫 (正式写手)


[交流] 有谁用过pETDuet-1,交流下

最近用pETDuet-1构建的质粒在做表达时几乎没有明显条带,不知道怎么回事呢,菌株BW25113用溶源化试剂盒已DE3化,质粒测序无误,表达条件25度,IPTG1mM,请教下有用过这个质粒做表达的大侠,帮我分析下可能原因,谢谢了
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山水88(金币+1): 谢谢参与
质粒没什么特别的,同样是t7启动子,拷贝数同PET系列,只不过有两个MCS。我觉得不是质粒的原因,可能是你DE3溶原没有做好,你溶原后有没有做过其他表达看看啊?比如以前在BL(DE3)中表达相当好的质粒,在你新的溶原菌里面表达,效果如何?
我做过DE3溶原,说实话,效果不咋的。
13楼2013-03-25 16:28:57
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)



山水88(金币+1): 谢谢参与
我们实验室之前有人用过,但是表达以后跑了蛋白电泳发现和对照一样,就没做了。
2楼2013-03-22 16:29:17
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wtli

新虫 (初入文坛)



山水88(金币+1): 谢谢参与
这个载体表达水平一般,而且两个MCS还会有表达不均一的情况,IPTG0.5,28度又到过夜试一试
3楼2013-03-22 16:43:41
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)



山水88(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福~~~~~~
6楼2013-03-22 23:41:49
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