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山水88

木虫 (正式写手)


[交流] 有谁用过pETDuet-1,交流下

最近用pETDuet-1构建的质粒在做表达时几乎没有明显条带,不知道怎么回事呢,菌株BW25113用溶源化试剂盒已DE3化,质粒测序无误,表达条件25度,IPTG1mM,请教下有用过这个质粒做表达的大侠,帮我分析下可能原因,谢谢了
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)



山水88(金币+1): 谢谢参与
我们实验室之前有人用过,但是表达以后跑了蛋白电泳发现和对照一样,就没做了。
2楼2013-03-22 16:29:17
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wtli

新虫 (初入文坛)



山水88(金币+1): 谢谢参与
这个载体表达水平一般,而且两个MCS还会有表达不均一的情况,IPTG0.5,28度又到过夜试一试
3楼2013-03-22 16:43:41
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)



山水88(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福~~~~~~
6楼2013-03-22 23:41:49
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)



山水88(金币+1): 谢谢参与
看到文献上有用的,好像还不错,自己没用过
8楼2013-03-23 17:57:57
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)



山水88(金币+1): 谢谢参与
表达量好像很低,但是没有做过表达,做过共转化
9楼2013-03-24 12:09:14
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alicelchf

木虫 (著名写手)



山水88(金币+1): 谢谢参与
也在用。。。
10楼2013-03-24 14:19:22
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山水88

木虫 (正式写手)


引用回帖:
9楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-03-24 12:09:14
表达量好像很低,但是没有做过表达,做过共转化

之前用BL21(DE3)做表达出现过大量表达,现在就没有这种现象了,所以不知道其中有什么需要注意的不
11楼2013-03-24 15:20:06
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山水88

木虫 (正式写手)


引用回帖:
10楼: Originally posted by alicelchf at 2013-03-24 14:19:22
也在用。。。

加油
12楼2013-03-24 15:20:23
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山水88(金币+1): 谢谢参与
质粒没什么特别的,同样是t7启动子,拷贝数同PET系列,只不过有两个MCS。我觉得不是质粒的原因,可能是你DE3溶原没有做好,你溶原后有没有做过其他表达看看啊?比如以前在BL(DE3)中表达相当好的质粒,在你新的溶原菌里面表达,效果如何?
我做过DE3溶原,说实话,效果不咋的。
13楼2013-03-25 16:28:57
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山水88

木虫 (正式写手)


引用回帖:
13楼: Originally posted by susizheng at 2013-03-25 16:28:57
质粒没什么特别的,同样是t7启动子,拷贝数同PET系列,只不过有两个MCS。我觉得不是质粒的原因,可能是你DE3溶原没有做好,你溶原后有没有做过其他表达看看啊?比如以前在BL(DE3)中表达相当好的质粒,在你新的溶原 ...

好的,非常感谢,我再把溶源化的菌株用试剂盒验证下试试,不行就用BL21做了。
14楼2013-03-25 17:09:51
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Rora_123

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主后来表达怎样?
15楼2017-07-01 21:06:41
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piaolilin

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
选用的酶切位点是?是不是移码突变了
16楼2020-03-13 13:36:58
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简单回复
fyz72324楼
2013-03-22 20:11   回复  
山水88(金币+1): 谢谢参与
2013-03-22 20:42   回复  
山水88(金币+1): 谢谢参与
haixiawu7楼
2013-03-23 00:02   回复  
山水88(金币+1): 谢谢参与
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