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putine

金虫 (小有名气)

[求助] Western blot结果分析

如图所示,N为未转染的细胞裂解液,A和C分别是带flag标签的两个蛋白(其实是一个基因的两个异构体,所以相差不大)。flag标签在N端。图片中所用抗体为Anti-flag M2。可见A有明显条带而c只有两个点,如果看actin的结果的话上样量基本一致,各位觉得可能是什么原因导致的一带一点呢?是转染效率的问题吗?

western.png
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
putine: 金币+18, 有帮助 2013-03-22 22:12:31
都是N-端Flag标签蛋白的话,结果应该是很相似的才对。建议楼主再次重复一下试验。。
4楼2013-03-22 12:24:58
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查看全部 6 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分析 2013-03-22 07:38:54
putine: 金币+1, 有帮助 2013-03-22 22:12:17
感觉是你转膜的时候胶没放正,C样品下面转出去了。
2楼2013-03-22 01:44:02
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
putine: 金币+1, 有帮助 2013-03-22 22:12:25
看C,两边有点,感觉像有带,估计是转膜的问题。把原来的样品再跑一块胶,一切就见分晓。
3楼2013-03-22 11:11:15
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putine

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-03-22 12:24:58
都是N-端Flag标签蛋白的话,结果应该是很相似的才对。建议楼主再次重复一下试验。。

谢谢 正在重复实验。发帖的时候有点急,有些部分没有说清楚,同一块胶上还杂了另外一个抗体,结果还是一样的,A是带,C是点。所以我才觉得是转染效率的问题
5楼2013-03-22 22:14:35
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