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putine

金虫 (小有名气)

[求助] Western blot结果分析

如图所示，N为未转染的细胞裂解液，A和C分别是带flag标签的两个蛋白（其实是一个基因的两个异构体，所以相差不大）。flag标签在N端。图片中所用抗体为Anti-flag M2。可见A有明显条带而c只有两个点，如果看actin的结果的话上样量基本一致，各位觉得可能是什么原因导致的一带一点呢？是转染效率的问题吗？

western.png
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1楼2013-03-21 21:07:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分析 2013-03-22 07:38:54
putine: 金币+1, ★有帮助 2013-03-22 22:12:17
感觉是你转膜的时候胶没放正，C样品下面转出去了。
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2楼2013-03-22 01:44:02
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
putine: 金币+1, ★有帮助 2013-03-22 22:12:25
看C，两边有点，感觉像有带，估计是转膜的问题。把原来的样品再跑一块胶，一切就见分晓。
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3楼2013-03-22 11:11:15
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
putine: 金币+18, ★有帮助 2013-03-22 22:12:31
都是N-端Flag标签蛋白的话，结果应该是很相似的才对。建议楼主再次重复一下试验。。
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4楼2013-03-22 12:24:58
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putine

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-03-22 12:24:58
都是N-端Flag标签蛋白的话，结果应该是很相似的才对。建议楼主再次重复一下试验。。

谢谢 正在重复实验。发帖的时候有点急，有些部分没有说清楚，同一块胶上还杂了另外一个抗体，结果还是一样的，A是带，C是点。所以我才觉得是转染效率的问题
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5楼2013-03-22 22:14:35
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by putine at 2013-03-22 22:14:35
谢谢 正在重复实验。发帖的时候有点急，有些部分没有说清楚，同一块胶上还杂了另外一个抗体，结果还是一样的，A是带，C是点。所以我才觉得是转染效率的问题...

应该是转膜的问题，建议你用考染液染一下膜
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6楼2013-03-23 00:23:04
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