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forgive09

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR分子标记的时候为什么部分DNA不能跑出来

本人在做苦瓜SSR的分子标记,但是几次过后,总是有部分DNA的条带不能跑出来,现在我用的是6%聚丙烯酰胺在跑电泳。电压是300V,跑的时间3个小时。到底是体系没有优化好呢,还是其他的什么问题呢?版里谁做过SSR标记的给我支个招,看看我做的苦瓜SSR的分子标记问题出在哪里,给点参考建议,我下面该如何是好?不胜感激

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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

【答案】应助回帖

恕我直言,你的问题就很含糊。一个个体出现多少条带并没有一定的,尤其是SSR这种短串联标记,这就是所谓个体差异。不是说每个个体都会出现预期的条带。如果motif=2,片段差2个碱基在凝胶你基本分析不出来。用SSR标记最好的检验方法是荧光标记因无,通过genescan才是分辨的最好方法,使用凝胶分析只是看个皮毛,粗略掌握以下Locus的多态性。

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将相本无种★男儿当自强
7楼2013-03-23 14:50:05
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qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是样品dna质量不高;有的泳道连引物二聚体都没有,所以也可能是扩增时候加的不准。再试几次,如果重复的效果还不是很好可以考虑重新提dna。当然也不是所有的样品都能有很好的条带,实在做不出来就算了,不要在一棵树上吊死。
2楼2013-03-21 11:21:19
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑之前把缓冲液冻成冰块,跑得时候放进缓冲液降温,希望对你有帮助。
从胶图上看不出什么问题。不知道你困扰在什么地方。
祝好
将相本无种★男儿当自强
3楼2013-03-21 14:15:13
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forgive09

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2013-03-21 11:21:19
可能是样品dna质量不高;有的泳道连引物二聚体都没有,所以也可能是扩增时候加的不准。再试几次,如果重复的效果还不是很好可以考虑重新提dna。当然也不是所有的样品都能有很好的条带,实在做不出来就算了,不要在一 ...

但是用不同引物有时候就能全部扩增出条带?这是体系的问题么?谢谢
4楼2013-03-21 22:58:19
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