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[求助]
SSR标记带型分析
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Sample Text 哪位专家帮忙分析一下：如附件图中的SSR标记电泳谱带存在什么问题？如何改进？ 上方的谱带是特异性带吗？请不吝赐教。  |
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西瓜: 回帖置顶 2012-05-31 09:39:54
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首先谢谢您的关注。请您在帮我们分析一下原因： 我们用的6%变性胶，95瓦1000伏预电泳20分钟，1倍的TBE缓冲液，上样量3ul. PCR反应条件： 预变性：94℃，5min 变 性：94℃，30s 退 火：55℃，30s 延 伸：72℃，40s 34个循环 延 伸：72℃，8min 保 存：4℃ PCR反应体系：10×Buffer 1.25 ul，dNTP (2.5mM) 1 ul，Primer1(2uM) 1 ul，Primer2(2uM) 1 ul，dH2O 6.55 ul，Taq(5u/ul) 0.2 ul，模板DNA 1.5 ul。 |
3楼2012-05-29 19:40:22
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固定液： 100ml冰醋酸加入900 ml去离子水。 银染液： 1升水中加入1.2gAg ,再加入1500ul甲醛。 显影液： 1升水中加入20gNaOH、1000ul甲醛和200 ul硫代硫酸钠，放入4℃冰箱预冷半小时以上。 银染过程： 固定 取合适的塑料盆加入1L新配制的10％冰醋酸溶液，轻轻摇动20分钟，至指示剂消色为止。 冲洗 去离子水水洗10分钟，最好分两次，每次5分钟。 银染 加入染色液银染30分钟。 显影 银染后用水快速冲洗（小于5秒），然后快速放入提前配好的显影液中显影。 固定 转入10％冰醋酸溶液，轻轻摇动3-5分钟。 冲洗 去离子水水洗2-3分钟。 干燥 室温下自然干燥，凝胶成像系统记录实验结果。 |
7楼2012-05-30 11:35:30
2楼2012-05-28 21:34:32
4楼2012-05-29 20:30:58
bluysky0902
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5楼2012-05-30 09:06:04
6楼2012-05-30 11:29:49
bluysky0902
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8楼2012-05-31 08:56:04
9楼2012-05-31 11:23:08
10楼2012-07-16 13:08:12
