应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-A克隆一直做不出来
51/1返回列表
查看: 2868  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

犁头狗

新虫 (初入文坛)

[求助] T-A克隆一直做不出来

片段345bp，用Taq酶扩增纯化后测得浓度为49.3ng/ul，用Takara pmd 19-T simple vector试剂盒连接，严格按照说明书操作，感受态细胞为DH5a，蓝白斑筛选结果 阴性对照没有菌落，阳性对照均为白色菌落，但是实验平板上却全是蓝色菌落，重复三次结果都一样，不知道原因在哪啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-17 22:37:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么酶扩增的？高保增需要加A的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2013-03-18 09:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 29 个回答

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-18 18:04:11
实验平板上却全是蓝色菌落,说明片段没连上.

Vector DNA和Insert DNA的摩尔比一般为：1：2～10。

你连接时间是多久呢??

我们实验室通常连接过夜呢.
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-17 22:59:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

犁头狗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-17 22:59:20
实验平板上却全是蓝色菌落,说明片段没连上.

Vector DNA和Insert DNA的摩尔比一般为：1：2～10。

你连接时间是多久呢??

我们实验室通常连接过夜呢.

我也是连接过夜的
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-17 23:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-01 11:08:11
你可以随便扩增一条不相关的片度，试试看能不能插进去，如果能，就针对目的基因设计一条引物。
赞一下(1人) 回复此楼
immunologyparasite
5楼2013-03-18 10:08:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 29 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭