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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎么才能知道提的蛋白好不好？
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[交流] 怎么才能知道提的蛋白好不好？ 已有3人参与

小弟最近在研究如何提植物的蛋白，以后会做2-D。
现在有个问题想向前辈们请教。
就是，在我做2-D之前，我如何才能知道自己提的蛋白好不好？
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1楼 2013-03-08 14:04:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不清楚你说的好不好是什么意思。你用的什么裂解缓冲液体系提的样品？做2D水化的时候蛋白样品是变性的，所以有人制备2D样品直接用含有尿素、硫脲、CHAPS的裂解液提。不过，也可以用普通缓冲液提。最重要的是样品中绝对不能有SDS这类离子去垢剂。如果缓冲液中含盐量高，最好除盐再上2D。
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2楼2013-03-08 15:46:42
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
sds-page
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3楼2013-03-08 18:42:15
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lys198886

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+2, 肺腑之言啊 2013-03-09 07:05:18
提的好不好要从好几个方面说明：首先最重要的是你提的蛋白的纯度要高，怎样才能知道你提的纯度的高低，得通过定量你才能知道。其次是你的蛋白里面杂质要尽可能的少，这个的等你的胶跑完后你才能知道。所以这个得在你做实验的过程中慢慢的摸索，别人给你说的都不如你自己亲自做一下实在，祝你实验顺利！
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4楼2013-03-08 22:58:43
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lys198886 at 2013-03-08 22:58:43
提的好不好要从好几个方面说明：首先最重要的是你提的蛋白的纯度要高，怎样才能知道你提的纯度的高低，得通过定量你才能知道。其次是你的蛋白里面杂质要尽可能的少，这个的等你的胶跑完后你才能知道。所以这个得在你 ...

谢谢！
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5楼2013-03-09 14:33:03
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-08 15:46:42
不清楚你说的好不好是什么意思。你用的什么裂解缓冲液体系提的样品？做2D水化的时候蛋白样品是变性的，所以有人制备2D样品直接用含有尿素、硫脲、CHAPS的裂解液提。不过，也可以用普通缓冲液提。最重要的是样品中绝 ...

我的意思是提出的蛋白种类是否丰富。
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6楼2013-03-09 14:36:53
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by guxinhan123 at 2013-03-08 18:42:15
sds-page

是不是就是垂直板电泳？
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7楼2013-03-09 15:14:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 湖畔狂想 at 2013-03-09 14:36:53
我的意思是提出的蛋白种类是否丰富。...

那要看你提取蛋白的方法。一般是比较几种方法，跑SDS-PAGE染色。
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8楼2013-03-10 00:00:36
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