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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pGEX-6p-3载体GST序列
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

[求助] pGEX-6p-3载体GST序列

本人近期用pGEX-6p-3这个载体，想知道这个载体上GST的序列。

[ Last edited by wizardfan on 2013-3-6 at 07:03 ]
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1楼 2013-03-05 21:14:18
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-03-06 07:01:41
wcx蜗牛: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-14 17:05:29
GST的序列包括在其中，没时间给你确定哪个起始了，你自己看一下。绿色是蛋白酶酶切位点，黄色是BamHI位点。
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  • 附件 1 : 无标题.jpg
    • 2013-03-05 22:57:46, 403.3 K
2楼2013-03-05 22:59:38
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-03-05 22:59:38
GST的序列包括在其中，没时间给你确定哪个起始了，你自己看一下。绿色是蛋白酶酶切位点，黄色是BamHI位点。

谢谢了，不知你有没有用这个载体表达蛋白，有些问题想交流下。
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3楼2013-03-14 17:06:19
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wcx蜗牛 at 2013-03-14 17:06:19
谢谢了，不知你有没有用这个载体表达蛋白，有些问题想交流下。...

没有，只用过6p-1.
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4楼2013-03-15 12:54:25
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-03-15 12:54:25
没有，只用过6p-1....

6p-1和6p-3一样的，我近期用pGEX-6p-3载体表达目的蛋白，将目的基因克隆到pGEX-6p-3后，加IPTG诱导表达，电泳发现除了表达GST和目的蛋白融合表达外，还有大量的单独GST蛋白表达。为什么会有大量的GST蛋白表达，请问你有没有遇到这种情况。
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5楼2013-03-18 14:08:45
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wcx蜗牛: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-03-24 12:59:59
引用回帖:
5楼: Originally posted by wcx蜗牛 at 2013-03-18 14:08:45
6p-1和6p-3一样的，我近期用pGEX-6p-3载体表达目的蛋白，将目的基因克隆到pGEX-6p-3后，加IPTG诱导表达，电泳发现除了表达GST和目的蛋白融合表达外，还有大量的单独GST蛋白表达。为什么会有大量的GST蛋白表达，请问 ...

可能的原因很多：1. 确认是否是单克隆； 2. 分子筛或离子交换分离GST蛋白与融合蛋白，融合蛋白放置一段时间后，看是否降解； 3. 有没有连续的T碱基，被认为是终止密码子后面的就不读了； 4. 你蛋白的基因序列可能含有连续的稀有密码子，连续的稀有密码子由于没有足够的转运RNA，使翻译提前终止。5. 确定是GST蛋白，而不是其他的蛋白。其他的可能暂时想不到，或许其他高手知道，能将这2者分开能继续试验就可以了，祝好运。看着给金币吧
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6楼2013-03-18 18:38:35
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cecilia533

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-03-15 12:54:25
没有，只用过6p-1....

方不方便给我一个6p1的pdf图谱和Vector的文件呢
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7楼2014-12-11 09:43:32
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