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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

[求助] pGEX-6p-3载体GST序列

本人近期用pGEX-6p-3这个载体,想知道这个载体上GST的序列。

[ Last edited by wizardfan on 2013-3-6 at 07:03 ]
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-03-06 07:01:41
wcx蜗牛: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-14 17:05:29
GST的序列包括在其中,没时间给你确定哪个起始了,你自己看一下。绿色是蛋白酶酶切位点,黄色是BamHI位点。

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  • 2013-03-05 22:57:46, 403.3 K
2楼2013-03-05 22:59:38
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-03-05 22:59:38
GST的序列包括在其中,没时间给你确定哪个起始了,你自己看一下。绿色是蛋白酶酶切位点,黄色是BamHI位点。

谢谢了,不知你有没有用这个载体表达蛋白,有些问题想交流下。
3楼2013-03-14 17:06:19
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wcx蜗牛 at 2013-03-14 17:06:19
谢谢了,不知你有没有用这个载体表达蛋白,有些问题想交流下。...

没有,只用过6p-1.
4楼2013-03-15 12:54:25
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-03-15 12:54:25
没有,只用过6p-1....

6p-1和6p-3一样的,我近期用pGEX-6p-3载体表达目的蛋白,将目的基因克隆到pGEX-6p-3后,加IPTG诱导表达,电泳发现除了表达GST和目的蛋白融合表达外,还有大量的单独GST蛋白表达。为什么会有大量的GST蛋白表达,请问你有没有遇到这种情况。
5楼2013-03-18 14:08:45
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wcx蜗牛: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-03-24 12:59:59
引用回帖:
5楼: Originally posted by wcx蜗牛 at 2013-03-18 14:08:45
6p-1和6p-3一样的,我近期用pGEX-6p-3载体表达目的蛋白,将目的基因克隆到pGEX-6p-3后,加IPTG诱导表达,电泳发现除了表达GST和目的蛋白融合表达外,还有大量的单独GST蛋白表达。为什么会有大量的GST蛋白表达,请问 ...

可能的原因很多:1. 确认是否是单克隆; 2. 分子筛或离子交换分离GST蛋白与融合蛋白,融合蛋白放置一段时间后,看是否降解; 3. 有没有连续的T碱基,被认为是终止密码子后面的就不读了; 4. 你蛋白的基因序列可能含有连续的稀有密码子,连续的稀有密码子由于没有足够的转运RNA,使翻译提前终止。5. 确定是GST蛋白,而不是其他的蛋白。其他的可能暂时想不到,或许其他高手知道,能将这2者分开能继续试验就可以了,祝好运。看着给金币吧
6楼2013-03-18 18:38:35
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cecilia533

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-03-15 12:54:25
没有,只用过6p-1....

方不方便给我一个6p1的pdf图谱和Vector的文件呢
7楼2014-12-11 09:43:32
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