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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

[求助] Native-PAGE

求助:
小弟最近在做Native-PAGE,12%的分离胶、6%的浓缩胶,Tris-甘氨酸电泳buffer,与SDS-PAGE的区别就是这三种都没有加SDS,其他成分一样。110V冰浴电泳,电流基本在10-20mA。电泳完成后切割部分条带进行考染。

出现问题是:我的蛋白都堆积在点样位置,并没有进行迁移。请高手解答,在线等,谢谢!
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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-05 18:57:10
是你的蛋白的等电点的问题,我不记得是偏酸还是偏碱的话,就在上样孔那里下不去了。可以尝试:往loading buffer里面加一点SDS,使得SDS在样品中的终浓度为0.0003%,室温放置一会然后上样,这样可以避免电荷对电泳的 ...

恩,我也认为等电点对native-Page的影响比较大,但是我不知道这个蛋白的信息,没法确定他的等电点,难道还要先去测下等电点么。。。我一直按照酸性蛋白的操作电泳,明天尝试下碱性的。谢谢!
8楼2013-03-05 19:44:28
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Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-03-05 20:21:59
你的是什么样品没给出来。看起来像是标准品?
如果是标准品的话,查查该蛋白等电点。
调整下溶液pH 试试?
2楼2013-03-05 15:54:00
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Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有种可能,确保电极没接反么。。。?
3楼2013-03-05 15:54:54
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xingyel

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能时间太短,非变性跑的慢一些
4楼2013-03-05 17:21:13
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