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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

[求助] Native-PAGE

求助:
小弟最近在做Native-PAGE,12%的分离胶、6%的浓缩胶,Tris-甘氨酸电泳buffer,与SDS-PAGE的区别就是这三种都没有加SDS,其他成分一样。110V冰浴电泳,电流基本在10-20mA。电泳完成后切割部分条带进行考染。

出现问题是:我的蛋白都堆积在点样位置,并没有进行迁移。请高手解答,在线等,谢谢!
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有个可能,在上样孔那里,有可能是你的蛋白是很大的聚体状态,我的就是这样的,在上样孔那里不下去。聚体太大了,七八百KDa。
6楼2013-03-05 18:58:38
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Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-03-05 20:21:59
你的是什么样品没给出来。看起来像是标准品?
如果是标准品的话,查查该蛋白等电点。
调整下溶液pH 试试?
2楼2013-03-05 15:54:00
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Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有种可能,确保电极没接反么。。。?
3楼2013-03-05 15:54:54
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xingyel

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能时间太短,非变性跑的慢一些
4楼2013-03-05 17:21:13
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