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第五平原

木虫 (正式写手)

[求助] 求助:表达载体上插入的目的基因所带的终止密码子是否会影响后面GUS基因的表达

小弟是做转基因的,用的表达载体是pCAMBIA1304,图已附上。我的目的基因插入位点是SpeⅠ和BglⅡ之间,但这个目的基因是带终止密码子的,终止密码子是否会影响后面GFP和GUS基因的表达吗?转基因检测时是否还能用GUS染色证明?求各位大神教我!

截图00.jpg
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勤勉
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honinglee

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
第五平原: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-26 21:56:13
35S碰到你的基因的终止子就会终止后面的mGFP和GUS的表达的。所以想用它的GUS还是把你的终止子去掉吧
天下事有难易乎?为之,则难者亦易矣;不为,则易者亦难矣。
2楼2013-01-26 17:29:08
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三吉草

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-26 21:29:44
第五平原: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-01-26 21:56:26
如果你的终止密码子不去掉的话,会影响GFP蛋白的表达。
你需要你的目的基因和GFP蛋白做成融合蛋白,这样你就需要把你的目的基因终止密码子去掉,目的基因和GFP可以共用35S启动子,同样,GUS基因也能共用35S启动子
3楼2013-01-26 17:56:07
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honinglee

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by honinglee at 2013-01-26 17:29:08
35S碰到你的基因的终止子就会终止后面的mGFP和GUS的表达的。所以想用它的GUS还是把你的终止子去掉吧

请问楼主我的为什么不是最佳答案?我说的不够清楚吗?
天下事有难易乎?为之,则难者亦易矣;不为,则易者亦难矣。
4楼2013-01-26 22:33:07
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cxt86

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
插入基因如果带终止密码子会对下游基因的表达有影响的,建议LZ还是去掉终止密码子比较保险。另外,插入的基因要根据选择的酶切位点和质粒图谱谨慎设计引物,避免密码子移位影响基因表达。
5楼2013-01-27 03:15:18
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第五平原

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by honinglee at 2013-01-26 22:33:07
请问楼主我的为什么不是最佳答案?我说的不够清楚吗?...

已经很清楚了,但是三楼的兄弟给我的信息更多,不过依旧谢谢你哦~
勤勉
6楼2013-01-27 23:00:44
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by honinglee at 2013-01-26 17:29:08
35S碰到你的基因的终止子就会终止后面的mGFP和GUS的表达的。所以想用它的GUS还是把你的终止子去掉吧

你把转录终止和翻译终止搞混了吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2013-01-28 01:57:13
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honinglee

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-28 01:57:13
你把转录终止和翻译终止搞混了吧...

当然指的是终止翻译了,外行?
天下事有难易乎?为之,则难者亦易矣;不为,则易者亦难矣。
8楼2013-01-28 10:20:45
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