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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
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cai3110274

木虫 (职业作家)

[求助] Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖

A260/A280=2.05   A260/A230=2.3   浓度1000ng/μL
电泳跑出来怎么会这样呢  ？
还有一个情况是 我的Trizol试剂是红色的  加氯仿  离心分 三层取上清的 时候  我的上层怎么还是红色的呢  没有无色 有没有知道的 帮忙指点一下 非常着急！ 感谢！
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夫天地者万物之逆旅
1楼 2013-01-17 10:49:40
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cai3110274

木虫 (职业作家)
RNA 电泳图

10000652649544.jpg
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夫天地者万物之逆旅
2楼2013-01-17 10:56:04
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cai3110274

木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-17 12:01:26
胶放反了。下面那些亮的是RNA，5S分开成条带，两条大的没分开。上样量是不是有些大了。点样孔有些亮，说明有蛋白核酸复合体。
trizol加入氯仿抽提离心后应该在下面的有机相里。这一步混合一定要充分，使氯仿充分萃 ...

我的材料就是酵母细胞  用液氮研磨后加进1ml的trizol里的   氯仿我加200μl，应该是对的吧。难道是我混合的不均匀，涡旋15秒 可以吗？还是我细胞的量加的多了？  怎么鉴定氯仿是好的还是有问题的？
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夫天地者万物之逆旅
5楼2013-01-17 17:41:57
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cai3110274

木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 淘气肥猫 at 2013-01-17 13:35:42
5S的带有点太亮了，可能有些降解。还有你的Trizol加的可能不够多，不能完全裂解样品，所以水相里的颜色来自未被充分裂解的样品，可能是血啊或者花青素啊什么的。还有再确定一下你的trizol和氯仿质量没问题吧

你好，我的是酵母细胞 应该没有什么色素，怎么确定氯仿的质量呢？trizol应该没有什么问题
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夫天地者万物之逆旅
6楼2013-01-17 17:43:30
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cai3110274

木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-18 07:36:15
可能是细胞加多了。混匀我一般也没有注意时间，大概是2×15秒吧。氯仿的疏水性更强，主要作用是抽提TRIZOL里面的酚，加速分层。氯仿一般不会有问题吧。...

麻烦帮我看一下 这是我新提的RNA  算合格吗？

10000349584316.jpg
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夫天地者万物之逆旅
12楼2013-01-19 20:30:37
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cai3110274

木虫 (职业作家)
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16楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-08 18:52:49
楼主还在不，可不可以把你的步骤发一份给我啊？我现在Trizol法提取后，质量也是不理想，向您取取经...

你好 我用的就是网上可以搜到的 液氮碾磨法 细节上我也没做变动
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夫天地者万物之逆旅
18楼2014-09-10 18:42:29
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