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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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tuwenwuguan

新虫 (正式写手)


[交流] 自杀型质粒如何发生两次重组?

在做自杀质粒重组的课题,但是久想都不得解该质粒怎样去与宿主菌的染色体发生两次重组呢?第一次是一段同源臂与互补区重组,这时候质粒是什么状态?断了?并且也连在染色体上?第二次重组又怎样发生?这里涉及的等位基因交换是咋回事?
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mtz0305

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyongl-168 at 2012-12-20 18:41:14
第一次重组有两种情况:1)插入型,即单交换,整个质粒全部整合进基因组;2)双交换,即替换型,通过上下游同源臂将抗生素基金整合进基因组;对于第二种情况,基因组敲除其实已经完成,对于第一种情况,由于毒性编码 ...

你好,我最近想做自杀质粒的实验,我现在有些困惑向你请教一下:目前我还没有自杀质粒,需要构建,考虑的转导方式有种:电转和结合转移。(1)若用电转化的话是不是质粒上就没有必要有oriT了,直接找一个普通的大肠窄宿主质粒,加上抗性和同源片段就可以了?其实我不太理解,质粒进去以后会不会被宿主的酶切成碎片,还有就是进行同源重组的时候是什么力量让质粒变成线性的。(2)结合转移,自杀质粒的oriT是不是只有和辅助质粒的oriT一样才能实现转移?用同一个群的其他转移质粒可以吗?   谢谢
5楼2013-12-24 10:12:57
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zhaodahe

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
tuwenwuguan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-10 15:56:42
一般是两个同源片段,第一次发生重组,质粒整合到基因组上;第二次是另一个同源片段重组,质粒又从基因组上掉下来。你也可以理解成质粒和基因组都断了,而他们俩首尾相连。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2012-12-10 07:57:42
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sdgxz

铁虫 (小有名气)


★ ★ ★
tuwenwuguan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-10 15:56:52
同意楼上。第一次同源重组是,质粒整个插入到染色体上,第二次时,可以认为是,在筛选压力存在的情况下,质粒自身发生环化,因为第一次重组后的染色体上有两对同源臂存在。如果不环化下编码毒性蛋白的基因的话,如SacB, 重组子是不长的
3楼2012-12-10 15:35:27
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yyongl-168

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
第一次重组有两种情况:1)插入型,即单交换,整个质粒全部整合进基因组;2)双交换,即替换型,通过上下游同源臂将抗生素基金整合进基因组;对于第二种情况,基因组敲除其实已经完成,对于第一种情况,由于毒性编码基因的存在,在相应选择压力下,如Sucrose,质粒必须环化出毒性编码基因才能存活,而该环化可能产生基因突变株。
4楼2012-12-20 18:41:14
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