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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自杀型质粒如何发生两次重组？
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tuwenwuguan

新虫 (正式写手)

[交流] 自杀型质粒如何发生两次重组？

在做自杀质粒重组的课题，但是久想都不得解该质粒怎样去与宿主菌的染色体发生两次重组呢？第一次是一段同源臂与互补区重组，这时候质粒是什么状态？断了？并且也连在染色体上？第二次重组又怎样发生？这里涉及的等位基因交换是咋回事？
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1楼2012-12-10 02:19:26
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mtz0305

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyongl-168 at 2012-12-20 18:41:14
第一次重组有两种情况：1）插入型，即单交换，整个质粒全部整合进基因组；2）双交换，即替换型，通过上下游同源臂将抗生素基金整合进基因组；对于第二种情况，基因组敲除其实已经完成，对于第一种情况，由于毒性编码 ...

你好，我最近想做自杀质粒的实验，我现在有些困惑向你请教一下：目前我还没有自杀质粒，需要构建，考虑的转导方式有种：电转和结合转移。（1）若用电转化的话是不是质粒上就没有必要有oriT了，直接找一个普通的大肠窄宿主质粒，加上抗性和同源片段就可以了？其实我不太理解，质粒进去以后会不会被宿主的酶切成碎片，还有就是进行同源重组的时候是什么力量让质粒变成线性的。（2）结合转移，自杀质粒的oriT是不是只有和辅助质粒的oriT一样才能实现转移？用同一个群的其他转移质粒可以吗？   谢谢
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5楼2013-12-24 10:12:57
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
tuwenwuguan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-10 15:56:42
一般是两个同源片段，第一次发生重组，质粒整合到基因组上；第二次是另一个同源片段重组，质粒又从基因组上掉下来。你也可以理解成质粒和基因组都断了，而他们俩首尾相连。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-12-10 07:57:42
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sdgxz

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
tuwenwuguan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-10 15:56:52
同意楼上。第一次同源重组是，质粒整个插入到染色体上，第二次时，可以认为是，在筛选压力存在的情况下，质粒自身发生环化，因为第一次重组后的染色体上有两对同源臂存在。如果不环化下编码毒性蛋白的基因的话，如SacB, 重组子是不长的
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3楼2012-12-10 15:35:27
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yyongl-168

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一次重组有两种情况：1）插入型，即单交换，整个质粒全部整合进基因组；2）双交换，即替换型，通过上下游同源臂将抗生素基金整合进基因组；对于第二种情况，基因组敲除其实已经完成，对于第一种情况，由于毒性编码基因的存在，在相应选择压力下，如Sucrose，质粒必须环化出毒性编码基因才能存活，而该环化可能产生基因突变株。
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4楼2012-12-20 18:41:14
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