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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量的引物可否在3‘非翻译区设计啊？
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量的引物可否在3‘非翻译区设计啊？

本人最近想做荧光定量，由于目的基因的3’非翻译区比较长，长达2000多bp，如果反转录的时候用oligo（dT）作为反转录引物，反转录的cDNA容易断裂，害怕在我的荧光定量引物之前cDNA就断裂了，那么我的定量就不准确了。请教各位大侠，能否在3‘非翻译区设计啊？
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xiayongxiu

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一切都要靠自己努力
1楼 2012-12-03 16:53:13
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jnzhang2000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiayongxiu: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-03 18:38:34
是可以的，但是3‘UTR特异性相对会差一些，所以一定要保证引物的特异性，设计完了要去BLAST一下。不过你的基因3’UTR有多长呀？很一般的反转录酶也可以保证至少1.5kb的反转效率，而且只要操作规范，mRNA也没那么容易降解。
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2楼2012-12-03 18:28:02
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
我已??知???答案了，最好还是????从3‘???转译区设计，毕竟CDS区??是编??蛋白质的，???翻译区???能存在?????性较高的问题，??过还是谢谢你的???情分享，最基本的东西我以??也看过，???光定??也???过1??2次，???是???得??怎么???想，主??还是因为???转录的问题，
赞一下 回复此楼
一切都要靠自己努力
3楼2012-12-03 18:35:15
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