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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 琼脂糖凝胶电泳出现问题了,是人品爆弱吗,大家给分析一下
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zwd-zzd

银虫 (初入文坛)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳出现问题了,是人品爆弱吗,大家给分析一下

最近在提放线菌的DNA,想检测一下是否提出DNA了,就直接跑了电泳,结果跑出来的结果是如此的不堪,是怎么回事呢,千万表告诉我是提DNA过程中出现问题了,50多株菌呢,不要让我哭死.

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1楼 2012-11-29 20:53:30
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wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zwd-zzd: 金币+1, ★有帮助 2012-11-30 08:13:06
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-12-03 11:16:20
不纯，有很多小片段导致拖尾而已。不知道你用来做什么，如果是PCR鉴定，直接p吧，一样可以用。
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2楼2012-11-30 00:51:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我想知道你右边的是不是marker。如果是，怎么跑成那样了？是EB的问题吗？样品里有蛋白、RNA污染。如果做PCR模板是可以的，如果是其他要求纯度高的实验的话可能不行。
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3楼2012-11-30 06:57:39
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zwd-zzd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wubingqi at 2012-11-30 00:51:08
不纯，有很多小片段导致拖尾而已。不知道你用来做什么，如果是PCR鉴定，直接p吧，一样可以用。

我是要做PCR的,可以直接P啊,那P的时候不会各种P不出来啊.
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4楼2012-11-30 08:15:07
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zwd-zzd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 06:57:39
我想知道你右边的是不是marker。如果是，怎么跑成那样了？是EB的问题吗？样品里有蛋白、RNA污染。如果做PCR模板是可以的，如果是其他要求纯度高的实验的话可能不行。

右边是marker,有点斜了,可能是我放的时候没贴着电泳槽边缘.就是要做模板的,可以用的话我就放心了.
话说我是跨专业读研的,本科学的是管理,从一开始做实验就各种不顺.大侠有什么经验可以指点一下吗?
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5楼2012-11-30 08:25:39
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zhangli9061

新虫 (初入文坛)
★
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-30 09:16:14
缓冲液缓冲能力下降，你估计采取的是热激法提取的DNA，不纯，不过用来PCR可以
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6楼2012-11-30 08:26:53
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zwd-zzd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhangli9061 at 2012-11-30 08:26:53
缓冲液缓冲能力下降，你估计采取的是热激法提取的DNA，不纯，不过用来PCR可以

谢谢大家的建议,嗯嗯........还是大家的智慧比一个人在那儿乱想强多啦.
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7楼2012-11-30 09:15:39
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wubingqi

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zwd-zzd at 2012-11-30 08:15:07
我是要做PCR的,可以直接P啊,那P的时候不会各种P不出来啊....

这个不好说，你要p的是什么片段啊，16s吗？还有就是不知道你提的DNA里面是否有抑制酶活性的东西，比如酒精没吹干了等等，如果有的话对PCR可能会有一定的影响。不过估计问题不大，这样的DNA我用来扩PCR一般都P出来了。另外楼上有人说得对，缓冲液换换新的吧，marker不好看。
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8楼2012-11-30 14:13:11
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翌景

新虫 (初入文坛)
支持换缓冲液，跑出来分子量比较大，不纯，蛋白质没去除干净吧，加蛋白酶或用抽提法较好，抽提操作很重要吸上清液的时候要从液面处缓慢的吸，不能吸到下面了，做分子实验要有耐心毅力啊，有时候要靠运气的，呵呵，加油哦
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zwd-zzd
9楼2012-11-30 15:49:30
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zwd-zzd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wubingqi at 2012-11-30 14:13:11
这个不好说，你要p的是什么片段啊，16s吗？还有就是不知道你提的DNA里面是否有抑制酶活性的东西，比如酒精没吹干了等等，如果有的话对PCR可能会有一定的影响。不过估计问题不大，这样的DNA我用来扩PCR一般都P出来了 ...

嗯,做16S,刚开始做PCR,经验还不足,该注意得地方真的太多.十分感谢.昨天我还为我做的结果各种纠结.今天听了大家的建议更改缓冲液,跑得好多啦.
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10楼2012-11-30 16:30:43
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