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yucheng9255

木虫 (著名写手)

[求助] 10kb的pcr产物能连到T载体上吗

想克隆一个10kb的片段,通过TA连接连到T载体上,这么大的片段是否可以,有没有什么注意事项,谢谢拉

[ Last edited by yucheng9255 on 2012-11-28 at 11:03 ]
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
10kb一次连肯定不行,至少要分成2次连接。有些试剂说是可以连20kb的,实际效果没那么好
10楼2012-11-29 05:10:45
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查看全部 18 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

这个真没有试过,效率可能会不高,但是连应该还是能连上的吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-28 12:35:16
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irenescbg

金虫 (小有名气)

我认为可以,但是我自己没有做过。看看你的kit说明书上怎么写的。
为什么一定要用TA 克隆?直接酶切连到普通载体不可以吗?
请赐予我正能量吧!加油!
3楼2012-11-28 13:38:53
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yucheng9255: 金币+2 2012-11-28 22:13:25
4-5kb的连到T载体上问题不大,也很好连,但是10kb的首先克隆出来的保真性肯定不高,建议高保证的酶,另外,在与T载体连接时建议提前浓度什么的根据说明书操作,要不然很容易连上应该还是蛮困难的
4楼2012-11-28 15:08:49
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