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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 10kb的pcr产物能连到T载体上吗
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

[求助] 10kb的pcr产物能连到T载体上吗

想克隆一个10kb的片段，通过TA连接连到T载体上，这么大的片段是否可以，有没有什么注意事项，谢谢拉

[ Last edited by yucheng9255 on 2012-11-28 at 11:03 ]
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1楼 2012-11-28 11:01:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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yucheng9255: 金币+2 2012-11-28 22:13:25
4-5kb的连到T载体上问题不大，也很好连，但是10kb的首先克隆出来的保真性肯定不高，建议高保证的酶，另外，在与T载体连接时建议提前浓度什么的根据说明书操作，要不然很容易连上应该还是蛮困难的
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4楼2012-11-28 15:08:49
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
这个真没有试过，效率可能会不高，但是连应该还是能连上的吧
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-28 12:35:16
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irenescbg

金虫 (小有名气)
我认为可以，但是我自己没有做过。看看你的kit说明书上怎么写的。
为什么一定要用TA 克隆？直接酶切连到普通载体不可以吗？
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请赐予我正能量吧！加油！
3楼2012-11-28 13:38:53
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FiFily

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你得先pcr出来才能考虑后续的实验。。。10K
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5楼2012-11-28 15:47:02
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by FiFily at 2012-11-28 15:47:02
我觉得你得先pcr出来才能考虑后续的实验。。。10K

已经pcr扩出来了，就是想查一下是否能连到载体上
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6楼2012-11-28 22:12:25
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by irenescbg at 2012-11-28 13:38:53
我认为可以，但是我自己没有做过。看看你的kit说明书上怎么写的。
为什么一定要用TA 克隆？直接酶切连到普通载体不可以吗？

ta连接比其他梅切连接效率高一些，而且连到t载体上对于我们就足够了
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7楼2012-11-28 22:13:18
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-28 15:08:49
4-5kb的连到T载体上问题不大，也很好连，但是10kb的首先克隆出来的保真性肯定不高，建议高保证的酶，另外，在与T载体连接时建议提前浓度什么的根据说明书操作，要不然很容易连上应该还是蛮困难的

说明说上写的是他们曾经在9 kb上成功过s
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8楼2012-11-28 22:14:38
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那只是曾经成功过，可能性不大的，但是商家会利用曾经这个词增加商品吸引力啊，我之前做定点突变，他也说能突变很大的，哪知道跑PCR都没条带的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2012-11-29 00:00:18
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10kb一次连肯定不行，至少要分成2次连接。有些试剂说是可以连20kb的，实际效果没那么好
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10楼2012-11-29 05:10:45
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