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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 第一次PCR产物电泳没有条带，请问用同一条引物跑2次PCR，能跑出条带吗？
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sherrysure

银虫 (小有名气)

[求助] 第一次PCR产物电泳没有条带，请问用同一条引物跑2次PCR，能跑出条带吗？

第一次PCR没有跑出条带来，
第二次用前一次的PCR产物作模板，
其他条件都相同，请问这样子有没有跑出条带来的可能呢？

如果不行，应该用什么方法改进？
第一轮产物所用模板理论上是可以跑出条带来的。
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1楼 2012-11-13 11:50:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

张力民

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-11-14 07:57:50
有可能会扩增出来，但我建议用touch down PCR可能会管用。或者减低退火温度。
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3楼2012-11-13 21:16:40
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普通回帖

mutant

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不行吧！你应该多设计几个退火温度啊！
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2楼2012-11-13 17:31:08
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以的，我以前干过这事，但如果你第一次鉴定没有条带的话，估计悬，试试吧
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4楼2012-11-14 08:40:10
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
touch down或者slow down结合巢式PCR应该能够解决
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5楼2012-11-14 08:57:22
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sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mutant at 2012-11-13 17:31:08
不行吧！你应该多设计几个退火温度啊！

恩恩，我跑的是梯度的~~
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6楼2012-11-14 09:12:48
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chachaxionga

新虫 (正式写手)
这个是有可能的，楼主可以尝试一下，核算电泳的分辨率是很低的，如果第一次扩增的量很少时，可能检测不到，你可以跑一下第二轮PCR。但是你PCR扩增不出来是有很多因素，多考虑一下，找到一个优化的条件
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7楼2012-11-14 13:45:56
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sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张力民 at 2012-11-13 21:16:40
有可能会扩增出来，但我建议用touch down PCR可能会管用。或者减低退火温度。

结果没有扩增出来，谢谢你的建议，我设touch down PCR的程序再试一试。
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8楼2012-11-14 19:56:10
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sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-14 08:40:10
可以的，我以前干过这事，但如果你第一次鉴定没有条带的话，估计悬，试试吧

不知道第一次扩增没有条带是什么原因呢？是因为模板基因组的浓度太低了吗？
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9楼2012-11-14 19:57:05
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sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chachaxionga at 2012-11-14 13:45:56
这个是有可能的，楼主可以尝试一下，核算电泳的分辨率是很低的，如果第一次扩增的量很少时，可能检测不到，你可以跑一下第二轮PCR。但是你PCR扩增不出来是有很多因素，多考虑一下，找到一个优化的条件

下一次打算用touch down试一试。谢谢你的建议。
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10楼2012-11-14 19:59:09
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