24小时热门版块排行榜    

查看: 3712  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

不鸣鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 求助设计引物加两个酶切位点

要扩增一段1.6~1.7kb左右的目的基因,筛选出了一对效果比较好的引物:
上游:5‘-GTGATTATTCATTTCGGAGGGTG-3’
下游:5‘-CAGGGTTCTTAATACATACATTGCT-3’
现在不想用T载体的酶切位点,想用simple T  克隆。在目的基因5’端加XbaI 酶切位点,3‘端加SalI酶切位点
   SalI识别位点  5’-G’‘TCGAC-3'
                       3'-CAGCT,G-5'
   XbaI识别位点 5‘-T’‘CTAGA-3’
                       3‘-AGATC,T-5'


请指导一下具体怎么加,需要加保护碱基吗
或者教给我方法,有资料也可以
新手先谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
不鸣鸟: 金币+2 2012-11-06 07:38:57
上游引物直接加上就行了,下游引物记得也是5‘-3’的方向,别搞错了,具体可以百度查看酶切位点表,酶切位点都是加在5’端。
9楼2012-11-05 14:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
不鸣鸟: 金币+2 2012-11-06 07:38:03
keepon
2楼2012-11-02 14:05:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不鸣鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-02 14:05:57
加保护碱基http://www.dxy.cn/bbs/topic/2574172?keywords=%E4%BF%9D%E6%8A%A4%E7%A2%B1%E5%9F%BA

请教一下这个具体加到引物序列上是怎么加的,两个酶切位点加到哪
3楼2012-11-02 14:13:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-05 20:13:46
不鸣鸟: 金币+2 2012-11-06 07:38:23
酶切位点当然要加在引物序列前面咯,也就是加在引物的5’端。保护碱基要查一下,楼上说过了。
不过楼主要注意啊,simple T有的也是有酶切位点的,我印象里Takara的pMD19-T simple本身就带了XbaI的酶切位点。
4楼2012-11-02 15:51:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 6/300 2026-08-25 08:44 by 白大多亮
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见