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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 求助设计引物加两个酶切位点

要扩增一段1.6~1.7kb左右的目的基因,筛选出了一对效果比较好的引物:
上游:5‘-GTGATTATTCATTTCGGAGGGTG-3’
下游:5‘-CAGGGTTCTTAATACATACATTGCT-3’
现在不想用T载体的酶切位点,想用simple T  克隆。在目的基因5’端加XbaI 酶切位点,3‘端加SalI酶切位点
   SalI识别位点  5’-G’‘TCGAC-3'
                       3'-CAGCT,G-5'
   XbaI识别位点 5‘-T’‘CTAGA-3’
                       3‘-AGATC,T-5'


请指导一下具体怎么加,需要加保护碱基吗
或者教给我方法,有资料也可以
新手先谢谢啦
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
不鸣鸟: 金币+2 2012-11-06 07:38:57
上游引物直接加上就行了,下游引物记得也是5‘-3’的方向,别搞错了,具体可以百度查看酶切位点表,酶切位点都是加在5’端。
9楼2012-11-05 14:43:49
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