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碧羽灵

银虫 (初入文坛)

[求助] 柱子堵了,什么原因?

我的色谱柱是新的,可是连续进了几次样以后柱前筛板发现堵了,我的样品浓度很高,进样后是超载的,这是按照药典上的方法做的,会不会是这个原因呢?还是其他的,求助各位
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jessiejzx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
听不到: 金币+1, 鼓励新虫发帖,欢迎常来分析版~ 2012-10-25 10:23:11
碧羽灵: 金币+2 2012-10-30 18:14:22
你安装预柱了吗?如果浓度很高,尽量安装预柱来保护柱子。堵了有可能是样品不干净,前处理没做好,比如植物样品有残渣、纤维素,动物样品有血丝、组织蛋白等等。所以要把前处理做好,进样前过0.45μm滤膜来确保干净。
另外,如果不是样品的原因,还有可能就是流动相。里边是不是加了盐?是不是容易堵的磷酸盐?这样走有机相盐容易析出,堵柱子。
淡泊以明志,宁静以致远
2楼2012-10-25 10:02:06
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普通回帖

lhp123789

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计是没有按照标准操作,流动相里有盐相,没有用有机相过度,
3楼2012-10-25 10:37:45
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魏宝红cool

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lhp123789 at 2012-10-25 10:37:45
估计是没有按照标准操作,流动相里有盐相,没有用有机相过度,

是大水相過度一下吧?这个问题我理解的不是很清楚,但就是觉得应该是水相過度,呵呵
4楼2012-10-25 17:25:51
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lhp123789

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 魏宝红cool at 2012-10-25 17:25:51
是大水相過度一下吧?这个问题我理解的不是很清楚,但就是觉得应该是水相過度,呵呵...

柱子用完后一定要保存在纯的有机溶剂中,过渡的时候一般有20%-30%的有机溶剂,用纯水过渡对柱子不好,容易毁坏柱子。
5楼2012-10-26 08:55:43
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chunlei2002

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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crity328: 金币+1, 鼓励交流,欢迎常来分析板块~~ 2012-10-29 22:04:53
也可能是样品处理的问题~处理的不干净~~
6楼2012-10-27 19:22:24
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淡淡幽雅

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


crity328: 金币+1, 鼓励交流,欢迎常来分析板块~~冲洗柱子的好方法~ 2012-10-29 22:04:40
甲醇:水=10:90      60分钟以上
甲醇:水=30:70       30min以上
  甲醇:水=80:20      30min以上   
纯甲醇30min以上
一入科研深似海,从此假日是路人
7楼2012-10-29 20:59:33
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容月~

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
碧羽灵: 金币+2 2012-10-30 18:14:10
唉...大多数堵了,都是因为样品问题!
1.样品浓度过高,使杂质及样品没有被洗脱出来残留在里面,使柱压升高。用高洗脱力的有机相慢慢冲洗。(哪个牌子的柱子打电话回去问问哪些高强溶解性的有机相不能冲)
2.样品前处理没有处理好,又没有安预柱,导致柱前堵塞,如果顺方向还可以冲动柱子,就尽量顺方向把柱子冲好。要是冲不动,就把柱子反正冲吧!可是是新柱子呀!没办法的时候只有这样了。
有希望就会有奇迹
8楼2012-10-30 10:06:06
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jackiesuo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


碧羽灵: 金币+1 2012-10-30 18:14:47
预处理没有做好,流动相一定要事先进行过滤,而且浓度过高对柱子的伤害特别大。如果事先安装个预柱子会好些。
9楼2012-10-30 10:50:26
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碧羽灵

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jessiejzx at 2012-10-25 10:02:06
你安装预柱了吗?如果浓度很高,尽量安装预柱来保护柱子。堵了有可能是样品不干净,前处理没做好,比如植物样品有残渣、纤维素,动物样品有血丝、组织蛋白等等。所以要把前处理做好,进样前过0.45μm滤膜来确保干净 ...

柱前没有安装预柱,但是样品使用0.45μm滤膜过滤的;流动相是磷酸盐缓冲液,但是盐浓度不高;我测完样以后,准备用90%水和10%乙腈冲柱子的,结果才开始冲柱压就飙升上去了
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10楼2012-10-30 18:09:10
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