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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样用western跑出caspase-3啊？求助。。。
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高洁琼

金虫 (正式写手)

[求助] 怎样用western跑出caspase-3啊？求助。。。

我们用14%的胶，180MA，45min转膜的。。。上了六个样本，今晚只出来两个淡淡的条带。平时压根什么都有没有。。。
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1楼 2012-10-23 21:39:39
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
高洁琼: 金币+1 2012-10-28 10:15:03
这个问题你没说清楚呀，从你给的信息来看，胶浓度有点大了。
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coasttocoast。
2楼2012-10-23 21:48:56
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高洁琼

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-10-23 21:48:56
这个问题你没说清楚呀，从你给的信息来看，胶浓度有点大了。

你跑出来过吗?  能说说你之前用的条件吗？
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3楼2012-10-23 21:57:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么叫跑不出来？Western是抗原抗体反应，和跑没关系吧。你是说蛋白分离效果不好，还是说膜转不上，还是说膜转好了但检测不到Western信号？
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4楼2012-10-24 07:06:12
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高洁琼

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-24 07:06:12
什么叫跑不出来？Western是抗原抗体反应，和跑没关系吧。你是说蛋白分离效果不好，还是说膜转不上，还是说膜转好了但检测不到Western信号？

我最终将条带曝光的时候，平时是上面一片空白，压根就没有啊！
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5楼2012-10-24 08:32:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 高洁琼 at 2012-10-24 08:32:31
我最终将条带曝光的时候，平时是上面一片空白，压根就没有啊！...

先确定上样量正确，转完膜后预染一下看看跑胶质量和转膜效果再做Western。
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6楼2012-10-25 06:19:20
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高洁琼

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-25 06:19:20
先确定上样量正确，转完膜后预染一下看看跑胶质量和转膜效果再做Western。...

谢谢，昨晚出来了。。。条带很清晰，趋势很明显，可惜趋势不太对
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7楼2012-10-25 08:46:40
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:59:56
我觉得你的转膜时间太短了吧，我是300mA转70-90min，效果还好，你转完之后染胶看看，并且可以染膜看一下
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8楼2012-10-25 08:47:29
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高洁琼

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jl860822 at 2012-10-25 08:47:29
我觉得你的转膜时间太短了吧，我是300mA转70-90min，效果还好，你转完之后染胶看看，并且可以染膜看一下

嗯，谢谢。昨晚曝光出来条带了，还很清晰，就是趋势不对，尽管趋势很明显
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9楼2012-10-25 11:34:47
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 高洁琼 at 2012-10-25 11:34:47
嗯，谢谢。昨晚曝光出来条带了，还很清晰，就是趋势不对，尽管趋势很明显...

杂内参试试，你上样量不一致吧
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10楼2012-10-26 08:31:49
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