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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

[求助] 鱼类基因组抽提和酶切出现问题,求救!

我抽提的是鱼类基因组,用试剂盒抽提的,连续三天,每天提一次。提出来浓度还好,260/280=1.8。但跑出来的电泳却是这样(20121022基因组)、酶切后是这样(20121022酶切),想问一下是为什么?多谢啦!
不好意思上传照片一直出错误,只好上传附近了,麻烦大家了!
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  • 附件 1 : 20121022基因组.jpg
  • 2012-10-23 14:41:29, 445.5 K
  • 附件 2 : 20121022酶切.jpg
  • 2012-10-23 14:41:31, 420.97 K

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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-24 11:11:30
1、楼主提取的是那种组织呢?还是小鱼全身组织?
2、只下载了基因组电泳图,胶孔教亮,可能有蛋白污染。
3、 跑电泳时注意缓冲液的浓度,你的有些偏浓了,稀释到1×,或者加点蒸馏水差不多就行。
4、 电泳时候电 ...

谢谢您的回复!
我提的是肾脏,电泳缓冲液用的是1x的,电泳时电压160v,时间25min。
提基因组是想酶切,然后做southern blotting,酶切的酶就是一些常见的,比如BamH1、EcoR1之类的。
4楼2012-10-24 14:45:56
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励热心应助 2012-10-24 13:51:15
xiangyubaoer: 金币+5, ★★★很有帮助, 有道理,有帮助! 2012-10-25 10:26:57
1、楼主提取的是那种组织呢?还是小鱼全身组织?
2、只下载了基因组电泳图,胶孔教亮,可能有蛋白污染。
3、 跑电泳时注意缓冲液的浓度,你的有些偏浓了,稀释到1×,或者加点蒸馏水差不多就行。
4、 电泳时候电压过高或者电流过大了,采用2/3出孔,出孔后调整到5V/cm或者根据凝胶的品质来选择电泳条件(比如 Fermentas Top Vision,支持大电流高电压)。图像会漂亮很多。
没切图看不到,不知是用什么酶切的。

希望楼主发问问题时候,尽量用语言描述清楚实验过程、实验结果,以及你有疑问的方面。大家好针对性的给你答复哟!
3楼2012-10-24 11:11:30
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