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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 鱼类基因组抽提和酶切出现问题，求救！
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

[求助] 鱼类基因组抽提和酶切出现问题，求救！

我抽提的是鱼类基因组，用试剂盒抽提的，连续三天，每天提一次。提出来浓度还好，260/280=1.8。但跑出来的电泳却是这样（20121022基因组）、酶切后是这样（20121022酶切），想问一下是为什么？多谢啦！
不好意思上传照片一直出错误，只好上传附近了，麻烦大家了！
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    • 2012-10-23 14:41:29, 445.5 K
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    • 2012-10-23 14:41:31, 420.97 K

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1楼 2012-10-23 14:42:20
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-24 11:11:30
1、楼主提取的是那种组织呢？还是小鱼全身组织？
2、只下载了基因组电泳图，胶孔教亮，可能有蛋白污染。
3、 跑电泳时注意缓冲液的浓度，你的有些偏浓了，稀释到1×，或者加点蒸馏水差不多就行。
4、 电泳时候电 ...

谢谢您的回复！
我提的是肾脏，电泳缓冲液用的是1x的，电泳时电压160v，时间25min。
提基因组是想酶切，然后做southern blotting，酶切的酶就是一些常见的，比如BamH1、EcoR1之类的。
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4楼2012-10-24 14:45:56
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励热心应助 2012-10-24 13:51:15
xiangyubaoer: 金币+5, ★★★很有帮助, 有道理，有帮助！ 2012-10-25 10:26:57
1、楼主提取的是那种组织呢？还是小鱼全身组织？
2、只下载了基因组电泳图，胶孔教亮，可能有蛋白污染。
3、 跑电泳时注意缓冲液的浓度，你的有些偏浓了，稀释到1×，或者加点蒸馏水差不多就行。
4、 电泳时候电压过高或者电流过大了，采用2/3出孔，出孔后调整到5V/cm或者根据凝胶的品质来选择电泳条件（比如 Fermentas Top Vision，支持大电流高电压）。图像会漂亮很多。
没切图看不到，不知是用什么酶切的。

希望楼主发问问题时候，尽量用语言描述清楚实验过程、实验结果，以及你有疑问的方面。大家好针对性的给你答复哟！
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3楼2012-10-24 11:11:30
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