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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题!

各位做过逆转录的高手们,本人在2012年6月20日购买到RT试剂盒,到现在快有5个月了,8月份才开始使用。在8月份的时候做RT-PCR目的基因可以扩增出来,等到9月中旬的时候,一直扩增不出目的条带,检测RNAOD比值2.01,电泳效果完整性也比较好,5s不太亮。我想问一下各位,有没有可能是试剂盒中的逆转录酶的活力下降了,反复冻融后活力下降了?我买了后没有分装逆转录酶,只是用的时候从-20度取出来,放在冰盒上操作,再放回-20度。前后如此操作差不多有20次。原因是不是8月份的时候是夏天,气温挺高的(四大火炉之一),酶拿出来后温差太大,这样子,反复冻融操作出现活力下降了!?? 请分析一下原因,谢谢了!
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-17 14:48:37
这种很正常,我觉得
1、是改基因表达量就是低
2、消化或者反转过程降解了

消除的方法可以用内参基因扩一下,扩出来就是说明1,出不来就是2
8楼2012-10-16 18:01:03
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