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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR实验疑问
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ding_winnie

无虫 (小有名气)

[交流] PCR实验疑问

各位在做PCR的时候有没有出现过这样的情况，25ul体系可以得到很好的目的条带，但是同样的条件，50ul就不能得到目的条带。而且这样的情况并不是每次都会出现，只针对某些基因片段。
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1楼 2012-10-09 18:57:14
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asdkingstar

金虫 (正式写手)
★ ★
ding_winnie(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-10 19:15:16
分子实验就是这样，第一次做可能有，但是第二次就没有，第三次还是没有，可是第4次又有了，它对条件要求很高，所以就会出现楼主这样的情况。随便更改个条件就会出现很多问题。
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2楼2012-10-09 20:32:02
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
★
ding_winnie(金币+1): 谢谢参与
确实好多分子实验都说不清楚的。楼主的反应体系就是对应加大的吗？也有可能是操作的问题,我也经常碰到类似情况。。。
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3楼2012-10-09 21:05:41
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飞飞0123

新虫 (初入文坛)
★
ding_winnie(金币+1): 谢谢参与
我今天就出现同样问题了，第一次负对照出现条带了，第二次做又所有的没有条带了，真不知道哪出问题了唉
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4楼2012-10-09 21:13:18
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
ding_winnie(金币+1): 谢谢参与
总体来说PCR是个简单的实验，但是却又很复杂，好多结果都不容易分析，难以找出原因，只能靠经验和推测，然后逆向验证
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5楼2012-10-10 08:15:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
ding_winnie(金币+1): 谢谢参与
这个我也遇到过，说不清原因。最后干脆就做25ul的了。如果PCR的效率不错的话回收克隆也够用了。
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6楼2012-10-10 08:52:02
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
弄两个25不就是50了吗……
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7楼2012-10-10 09:03:31
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s20121113

铜虫 (正式写手)
路过，来学习一下！
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8楼2012-10-11 08:43:34
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哎，这个是个很郁闷的事情，明明前一次做得时候有么，下一次就没有了
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9楼2012-10-11 22:35:57
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佩琪

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我在做实验的过程中也发现，一般小体积比大体积的PCR效果要好，而且不同的PCR仪P出的效果也不一样~
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10楼2012-10-12 16:22:50
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冬至1221

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是的哇 如果50的P不出来就用25的
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11楼2012-10-13 22:47:03
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ding_winnie

无虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by asdkingstar at 2012-10-09 20:32:02
分子实验就是这样，第一次做可能有，但是第二次就没有，第三次还是没有，可是第4次又有了，它对条件要求很高，所以就会出现楼主这样的情况。随便更改个条件就会出现很多问题。

是的呢~经常反复，但是总结额几次的经验，发现P不出来还是有原因的，所以做实验就是要总结各种经验~祝各位实验顺利！
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12楼2012-12-28 10:55:39
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清风寨

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到了 做了N次才发现25的能出来  郁闷死了 以后就只能做25的体系
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13楼2012-12-28 13:24:15
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ding_winnie

无虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 清风寨 at 2012-12-28 13:24:15
我也遇到了 做了N次才发现25的能出来  郁闷死了 以后就只能做25的体系

有可能是50ul体系大，传热不好，没太弄明白是怎么回事，反正25可以P出来就好了~祝实验顺利！~
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14楼2012-12-28 14:21:49
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