应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于分步双酶切
51/1返回列表
查看: 1406  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

策马入林

新虫 (小有名气)

[求助] 关于分步双酶切

我以前用sacI和BamhI直接双酶切效果很好，现在换了酶后感觉效果不太好，想试试个分步酶切，请问具体应该怎么操作，我看两种酶适应的buffer不同，是否在第一次酶切后再回收然后再酶切，还是可以直接加入第二种酶和buffer继续酶切呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-10-05 12:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
策马入林: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-06 20:26:38
引用回帖:
4楼: Originally posted by 策马入林 at 2012-10-06 14:01:20
嗯，我以前用的Kbuffer作为共同buffer来切的，效果还是不错的，用的是takara的酶，我看了下neb的酶上标的是这两个酶得分步酶切，不过我也不清楚可靠不。我再仔细研究下他们各自buffer有什么不同吧，先谢过了哈，那 ...

虽然两种酶的默认最佳buffer不同，但NEB buffer4中这两种酶的活性都是100%，可以用来同时双切。你再看看Takara的各种缓冲液对两个酶的活性。分步切时简单的乙醇沉淀就完全足够的，只要可以除去第一个酶切缓冲体系中的各种成分，能够重建第二个酶切体系就行了。看了下面你建的酶切体系，不知道你是否定量了你的质粒浓度。有时候浓度太高也会影响酶切效果。
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-06 16:49:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这两个酶可以用同一个buffer切。如果你想用他们各自的buffer做酶切，可以看一下两个buffer成分的区别，如果可以简单的补足的话，中间就不用回收，做好一个酶切后加入不足的成分建立第二种酶切体系。否则，先用一个酶切，纯化回收，再建另一个酶的反应体系。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-05 15:55:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asdkingstar

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主你现在做的是ARDRA分型么？你之前的双酶切是直接加入两种酶和通用buffer进行没切的吗？具体的加样体系是什么？
赞一下 回复此楼
爱是浅浅的喜欢，喜欢是浅浅的爱。
3楼2012-10-06 10:12:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

策马入林

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-05 15:55:33
这两个酶可以用同一个buffer切。如果你想用他们各自的buffer做酶切，可以看一下两个buffer成分的区别，如果可以简单的补足的话，中间就不用回收，做好一个酶切后加入不足的成分建立第二种酶切体系。否则，先用一个酶 ...

嗯，我以前用的Kbuffer作为共同buffer来切的，效果还是不错的，用的是takara的酶，我看了下neb的酶上标的是这两个酶得分步酶切，不过我也不清楚可靠不。我再仔细研究下他们各自buffer有什么不同吧，先谢过了哈，那个我要是纯化后再做可以使用简单的乙醇沉淀来回收吗
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-06 14:01:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭